6、code接头混合物2总体积281.在每个PCR管内加入2微升DNA连接酶。4.充分振荡混匀,轻度离心将液体收集到管底。(也可以选择用枪吸取一半以上的液体上下吹打至少5次来混匀)5.将PCR管放入PCR仪,按以下程序运行。温度时间22℃30分钟72℃10分钟10℃持续(最长至1小时)暂停点–产物可以置于–20°C保存。纯化未扩增的文库使用Agencourt®AMPure®XP试剂1.5x样本体积重要事项!–将AMPure® XP reagent 置于室温并充分振荡将磁珠混匀,使用时缓慢吸取.接下来的步骤需要使用新鲜配置的70%乙醇。对每个样品,混合230微升无水乙醇和100微升
7、无核酶水。1.将加完接头的文库转移至1.5ml离心管内,加入45微升(1.5x样本体积)的Agencourt®AMPure®XP试剂。用枪吹打5次使DNA与磁珠悬浮液充分混匀。2.将混合液置于室温5分钟。3.将1.5ml离心管置于DynaMag™‐96 Side Magnet (Cat. no. 12331D)磁力架上,静置2分钟或者等溶液变清澈。小心地吸走并弃掉上清,不要扰动磁珠。4.向离心管中加入150μL新鲜配制的70%乙醇,在磁力上来回移动1.5ml离心管来洗涤磁珠,然后小心地弃去上清,不要扰动