《抗人fcεriα 》word版

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1、研究生优秀毕业论文上海交通大学博士学位论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：私寝，日期：沙岱年厂月7日万方数据上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保

2、留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于，不保密窗。(请在以上方框内打“4’’)学位论文作者签名：鹚暇指导教师签名：日期：沙f5年，月寸E1日期：勘t阵厂月乎日万方数据上海交通大学博士学位论文抗人FccRIaFab．聚合物胶束．雷公藤红素诱导肥大细胞凋亡治疗过敏性疾病摘要研究目的：构建偶

3、联抗人FceRIotFab包裹雷公藤红素的聚合物胶束(抗人Fce．RlctFab．聚合物胶束．雷公藤红素三聚物)，分析其对肥大细胞的靶向性、增殖抑制及促凋亡作用，探讨其在过敏性哮喘小鼠体内的分布及对哮喘和被动皮肤过敏反应的抑制效果。研究方法：①采用薄膜水化法制备雷公藤红素．聚合物胶束，EDC偶联法构建抗人FceRItxFab．聚合物胶束．雷公藤红素三聚物，采用粒度分析仪、透射电子显微镜分别观察胶束的粒径和形态，反相．高效液相色谱法测定其包封率和载药量。②体外以人外周血嗜碱性白血病细胞KU812(

4、表面高表达Fc8RI，靶细胞)和人未成熟肥大细胞HMC．1(表面几乎不表达FceRI，非靶细胞)为研究对象，以香豆素6为探针，采用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测三聚物的靶向作用；CCK一8法测定细胞增殖抑制率，AnnexinV-FITC／PI双标记合并流式细胞仪定量分析凋亡细胞比率，酶法和免疫印迹分别检测凋亡分子caspase3活性和切割的PARP表达水平，分析三聚物对肥大细胞增殖抑制及凋亡作用。⑧以卵清蛋白免疫万方数据上海交通大学博士学位论文BABL／c小鼠建立哮喘模型，以近红外荧光素DiR

5、为探针，观察三聚物在过敏性哮喘小鼠体内的分布及其对肺组织的靶向性；给予三聚物干预治疗，ELISA法检测血清OVA特异性IgE(OVA-slgE)和肺泡灌洗液(BALF)组胺的水平，采用Luminex技术测定BALF中Thl／Th2细胞因子的含量，计数BALF白细胞总数及嗜酸性粒细胞数，观察肺组织炎症情况，分析三聚物对过敏性哮喘的治疗效果。此外，通过皮内注射IgE．DNP和尾静脉注射DNP-HSA诱导小鼠被动皮肤过敏反应，给予三聚物干预治疗，观察伊文氏蓝扩散程度，验证三聚物对过敏反应的抑制作用。研

6、究结果：①制备了抗人FceRIotFab．聚合物胶束．雷公藤红素三聚物，包封率为98．9-t：3．3％，载药量为22．8+1．O％，粒径在93．43nm左右，分布均匀，呈短棒状或椭圆状。②流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果显示抗人FceRIotFab．聚合物胶束进入靶细胞的量显著高于未偶联抗体的胶束；细胞增殖和凋亡的结果表明抗人FceRIotFab-聚合物胶束．雷公藤红素三聚物作用组的肥大细胞抑制率、凋亡细胞比例、caspase3活性和切割的PARP水平均显著高于单纯的雷公藤红素和雷公藤红素．

7、聚合物胶束组。⑨体内研究结果表明，三聚物能促进药物在过敏性哮喘小鼠的肺组织聚集，并有效地减少哮喘小鼠血清OVA-slgE、BALF组胺和Th2细胞因子(IL．4、IL．5、IL．13和TNF．仅)的合成，增加抗炎因子IL．10的分泌，降低BALF白细胞和嗜酸性粒细胞数量，减轻肺组织炎细胞浸万方数据上海交通大学博士学位论文润和黏液分泌：此外三聚物能有效减少伊文氏蓝的渗出，降低血管通透性，减轻小鼠被动皮肤过敏反应。且三聚物的抗过敏效果明显比单纯的雷公藤红素和雷公藤红素．聚合物胶束组更强。研究结论：成

8、功构建了抗入FceRIaFab．聚合物胶束．雷公藤红素三聚物，该三聚物具有良好的表征和肥大细胞靶向性，能特异地抑制肥大细胞增殖、诱导其凋亡；在体内能促进药物在过敏性哮喘小鼠肺部聚集，对小鼠过敏性哮喘和被动皮肤过敏反应具有明显的抑制作用。这些结果提示抗人FceRIaFab-聚合物胶束．雷公藤红素三聚物具有治疗过敏及肥大细胞相关疾病的潜在应用价值。关键词：雷公藤红素，聚合物胶束，抗人FceRIQ单抗Fab片段，肥大细胞，凋亡，过敏性疾病万方数据上海交通大学博士学位论文TARGET玎呵GMASTCEL