人呼吸道合胞病毒m蛋白非复制型重组腺病毒的构建和鉴定-免疫学专业毕业论文

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1、安徽医科大学硕士学位论文中英文缩略词表英文缩略词英文全称中文名称AAAminoacid氨基酸AdAdenovirus腺病毒AmpAmpieilin氨卞青霉素BSABovineserumalbumin牛血清自蛋白CMVCytomegalovirus题细胞病毒SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠ECLEnhancedChemiluminescence增强化学发光APAmmoniumPersulfate过硫酸铵TEMEDTetramethylEthyleneDiamine网甲基乙二胺EDTAEthylenediamineTetraac

2、etieAcid乙二胺四乙酸EBEthidiumBromide溴化乙锭bpBasePair碱基对KbKilobase千碱基对最coliEscherichiacoli埃希氏大肠杆菌DMEMDulbecco’SModifiedEaglesMedium改良Eagles培养液玎RInvertedterminalrepeat反转重复序列ORFOpenreadingframe开放阅读框两STrishydfoxymethh3，iaminomethane三羧酸甲基氨基甲烷安徽医科大学硕士学位论文PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链反应RT-PC

3、RReverseTranscription—PCR逆转录PCRPAGEPolyacrylamideGelElectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳5一Bromo一4一Chloro一3-Indolyl一13一D5．溴．4．氯．3．吲哚．B—DX—gal．Galactoside一半乳糖替Respi删。翠sync如alvinlsa鼓ac妇lent呼吸道合胞病毒G蛋自RSVGproteinm瑚NAmessengerribonueleicacid镶使核糖核酸kDaKilodalton千道尔顿DEpCDiethylpyroearbonate二乙基焦碳酸盐So

4、diundodecylsulfatepolyacrylamind十二烷基磺酸钠一SDS．PAGEgdeletrophoresis丙烯酰胺凝胶电泳椰PDeoxy-ribonucleosidetriphosphate脱氧核糖三磷酸无钙镁的磷酸盐缓冲PBSPhosphatebufferedsaline液PMSFPhenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟化物TBSTTrisBufferedSalinTween一20Tris缓冲盐水+吐温2学位论文独创性声明本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除

5、了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢意。学位论文作者签名：学位论文使用授权声明本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名：＼b嗽导师签名：嗍厶微日期：秒髻．

6、，。jD安徽医科大学硕士学位论文人呼吸道合胞病毒M蛋白非复制型重组腺病毒的构建和鉴定中文摘要目的人呼吸道合胞病毒(HumanRespiratorySyneytialVirus，RSV)广泛分布于世界各地，是导致婴幼儿严重下呼吸道感染的最重要的病毒病原。目前尚无特异性防治方法，世界卫生组织将发展RSV疫苗列为最优先发展的疫苗顼蜀之一。RSV的11种蛋白中，RSV的基质蛋白(matrixprotein，M)是位于病毒包膜内侧躬结构蛋鑫，在RSV病毒形态发生上具有重要{搴羽，同时对宿主缨胞的转录具有抑制作用。为进一步开展M蛋白的功能研究及寻求RSV疫苗研制的

7、新方法，我们克隆了RSVM基因并完成了可表达RSVM蛋自的菲复制型重组腺病毒的构建及鉴定。方法根据编码M蛋白的基因序列设计引物，通过RT—PCR从感染RSV的HEp一2细胞中扩增获得M蛋自基因，克隆到pGEM．TEasy载体审，序列测定正确焉，将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3。l(+)中，并进行酶切鉴定，脂质体法转染COS．7细胞，应用Westernblotting方法分析M基因表达情况。限制性内切酶从pT／M中切下蹋的基因M，亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV，获得重组穿梭质粒pSC／M。酶切鉴定后，PmeI线性化pSC／M，利用电穿

8、孔法转化技术，把线性pSC／M转入含有pAdEasy-1的大肠杆菌E．coliBJ5183中进