黄芪甲苷地缺血心肌促血管新生作用及其与mirna-21关系研究

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1、分类号：R54单位代码：10312密级：学号：20112626南京医科犬掌博士学位论文(专业学位)题万方数据南京医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。篡～舞麓学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交

2、论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1、保密口，在一年解密后适用本授权书。2、不保密口。作者签名：日期：P，)；∥月r日汐cF、么，。翩虢才乞别址期：年月日万方数据南京医科大学博士学位论文目录目录1中文摘要。Abstract．．3前言7第一部分黄芪甲苷对大鼠急性心肌梗死模型促血管新生作用及相关机制研究。9小结．27参考文献28第二部分黄芪甲苷促血管

3、新生作用及与miRNA．21关系研究．32第一节黄芪甲苷对EA—hy926细胞VEGFmRNA、miRNA．21及VEGF蛋白表达的影响．32第二节脂质体转染EA．hy926细胞后研究黄芪甲苷促进血管新生作用及与miRNA．21乡∈勇§．42，j、结．58参考文献58文献综述缺血性心肌病诊疗进展60攻读学位期间发表文章情况．73致谢．74万方数据南京医科大学博士学位论文中文摘要目的研究黄芪甲苷(AS-IV)对缺血心肌组织以及体外培养EA-hy926细胞中VEGF及miR．21表达的影响，探讨AS．IV诱导血管新生与miR．21的关

4、系。方法1．将24只急性心肌梗死大鼠模型分为：模型组、AS．IV低剂量组、AS．IV高剂量组，每组8只，及假手术组(8只)。术后次日起AS—IV低剂量组灌J]艮30mg／kg／d，AS．IV高剂量组灌]]艮100mg／kg／d，模型组和假手术组大鼠灌胃等量蒸馏水。连续给药14天后，每组取4只经结扎点位置横断心脏，剪取心肌梗死及周围区域，放入到4％多聚甲醛液中固定，作HE染色及免疫组化检测微血管(CD34标记)和微动脉形成(0【．SMA标记)；另每组取4只，作心肌梗死范围测定，WesternBlot检澳IJVEGF，RT．PCR检测

5、VEGFmRNA、miR．21的表达情况；2．以不同浓度AS-IV(109rnol／L、30I-tmol／L、1001amol／L)孵育EA．hy926细胞48小时，以空白作对照；WestemBlot法检测细胞中VEGF水平；RT-PCR检测细胞中miR．21、VEGFmRNA表达；3．用脂质体Lipofectamine2000将miR．21mimic、miR．21inhibitor转染EA-hy926细胞，分为对照组(negtivecontr01)、AS．IV(1009mol／L)组、miR-21mimic组、miR．21inh

6、ibitor组及AS．IV(100I-tmol／L)+miR．21inhibitor组，孵育48小时。WesternBlot法检测细胞中VEGF及p-Akt蛋白表达水平；RT-PCR检测VEGFmRNA及AktmRNA水平；CCK8法测定细胞增殖；以基质胶管腔形成实验来评估体外血管新生情况。结果1．AS．IV组心肌组织梗死面积百分比均低于心肌梗死模型组(尸<0．05)，且AS．IV高剂量治疗组低于AS．IV低剂量治疗组(尸

7、IV低剂量治疗组(尸<0．05)；AS．IV治疗组VEGF蛋白表达高于心肌梗死对照组万方数据南京医科大学博士学位论文(尸<0．05)，且AS．IV高剂量治疗组高于AS—IV低剂量治疗组(尸

8、IV(1009mol／L)可达到最大的促VEGF相关mRNA，miR21表达作用；3．AS．IV(1009mol／L)、miR．21mimic组VEGFmRNA、AKTmRNA水平较对照组明显升高(P<0．05)，而在miR-21inhibitor