notch2nrr蛋白的表达与纯化

《notch2nrr蛋白的表达与纯化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、长春理工大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的硕士学位论文．(Notch2NILR蛋白的表达与纯化》是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外．本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：旌墨螽丝!年三月—生日长春理工大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解“长春理工大学硕士、博士学位论文版权使用规定

2、”，同意长春理工大学保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权长春理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。也可采用影印，缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。作者签名：蕉堡盘塑!!年—王月墨一日指导导师签名：辑越0扯年卫显a摘要Noah信号通路在动物的生长中具有很重要的作用，尤其是对动物的发育有很深的影响。研宄表明NoIch信号与多种疾病有密切的关系。特别是在肿瘤的形成和发展中．Notch信号通过不同的方式来影响肿瘤，因此No

3、tch受体可以作为一个治疗癌症的靶点。本论文通过构建一个包含Notch2负调节区NRR(文中简称NRR2)序列的载体．进而表达Notch2的负调节区蛋白．通过蛋白纯化的方法得到纯化的N0tch2负调节区NRR蛋白．进而可以在体外测定其和目标化合物的亲和力，从而对潜在的天然配体进行大规模的初步筛选。本论文中成功构建了带有六聚组氨酸标签的Notch2负调节区NRR序列的载体．井成功进行了蛋白表达，进过酶切、电泳以及序列测定等方法，确定得到的载体序列(太小为800bp)和蛋白(分子量为28KDa)都是

4、正确的．进一步通过蛋白纯化的方法得到了纯度为85％的Notcll2负调节区NRR蛋白。关键词：Notch2NRR质粒载体蛋白纯化ABSTRAC丁TheNotchsignalingpathwayhasveryimportanteffectintheprocessofanimalgrowth．especiallyintheanimaldevelopmentResearchindicatesthattheNotchsignalhasacloserelationshiptovariousdiseases

5、anditplaysaimportantroleintheformationandprogressionoftheRlmorTherethre．theNotchreceDtorcanbeusedaSatherapeutictargetmCa／lCeLThenegativelyregulatoryregionsproteinolNotch2isexpressedbyconstructingavectorwhichcontainsNRRsequencesofnegativelyreguhitoryr

6、egionsofNotch2(ealledNRR2forshort)inthepaper．ThepurifiedproteinofnegativelyregulatoryregionsofNotch2callbeusedtotesttheaffmiLvbetweenNRRproteinandtargetcompoundsinviⅡoinordertohigh-throughputpreliminary．screenpotentialligandsThevectorhasbeensuccessfu

7、llyconstructedincludingthesequenceofthenegativeregulatoryregionofNotch2whichistaggedwithhexahistine．thentheproteinofnegativeregulatoryregionofNotch2hasbeenexpressedsuccessfull)№determinedthatthesequence(800bp)andtheprotein(28KDa)we”gainedwel-ecoreeet

8、．withthemethodsofidentificationendonucleasedigestion．sequencingandelectrophoresisUltimately．theproteinofnegativeregulatoryregionofNolch2wasobtainedwithapufit．xof85％KnⅥords：Notch2NRRvectorproteinpurified目录摘要ABSTRACT目录第一章绪论§11Notch的发现与功能S】2Notch的结构§l3N