mcu、micu1在大鼠脑梗死模型中的作用及机制

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4、疗方法，但是溶栓治疗严格的时间窗使绝大多数患者很难在规定的时间内到医院接受治疗。脑梗死后神经损伤的病理生理机制是比较复杂的级联反应，主要包括兴奋性氨基酸毒性、氧化应激、炎症和凋亡等。缺氧时，谷氨酸兴奋毒作用的关键病理过程之一是钙离子内流引起钙超载。钙超载导致一系列钙依赖性酶被激活，致使自由基产生增加。从而引起线粒体受损、脂质过氧化、ATP匮乏、ROS产生、核酸断裂等，最终导致神经元死亡。线粒体钙浓度与线粒体能量代谢、膜通透性密切相关，也会对胞浆钙信号进行修饰进而影响细胞功能。线粒体钙离子单向转运体(Mitochondrialcalciumuniporter，MC

5、U)是新近鉴定出的线粒体内膜上参与线粒体钙摄取的重要结构。MICUl(Mitochondrialcalciumuptake1)是MCU的调节蛋白，其对MCU的作用是激活还是抑制，尚且存在争议。由此看来，这种高度复杂而精确的调节作用仍有待深入研究。新近研究表明MCU参与神经细胞谷氨酸兴奋毒，抑制MCU可减少线粒体钙摄取，保护线粒体功能从而减少神经元死亡。因此我们思考MCU、MICUl与脑梗死的相关性，能否通过干预MICUl与MCU的表达来扼制钙超载从而挽救脑梗死中受损细胞?这一新的思路研究期望提供一个脑梗死治疗的新靶点。方法：1采用成年健康雄性Sprague．Da

6、wley大鼠，随机分为正常对照组(contr01)、假手术组(sham)、大脑中动脉栓塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)组(分为3h、6h、12h、24h、48h、72h六个时间点)，应用Longa等的线栓法建立MCAO大鼠模型。术后麻醉清醒后对大鼠进行神经功能评分。在上述不同时间点将动物断头处死，用2％2，3，5．三苯基四唑氮红(triphenyltetrazoliumchloride，TTC)染色法测算脑梗死体积，用蛋白质印迹法(WesternBlot)、实时定量荧光聚合酶链式反应万方数据中文摘要(Real-timer

7、eversetranscription-quantitativePolymeraseChainReaction，RT．qPCR)和免疫组化来观察MCU、MICUl、cleaved．caspase3的表达情况，用透射电镜观察细胞及线粒体超微结构变化，用流式细胞分析技术检测线粒体功能。2采用成年健康雄性Sprague．Dawley大鼠，随机分为正常对照组(contr01)、假手术组(sham)、MCAO12h组、尤瑞克林+MCAO组(尤瑞克林0．00875PAN／kg+MCAO)。给药组动物梗死后尾静脉注射尤瑞克林0．00875PAN／kg，正常对照组、假手术组和M

8、CAO组给予等容量生理盐水。术后麻醉清醒后对大鼠进行神经功能评分。梗死后12h大鼠断头处死，TTC染色法测算脑梗死体积，用WesternBlot来观察MCU及凋亡蛋白cleaved．caspase3的表达情况。结果：lMCAO组各个时间点可见左侧肢体偏瘫症状，神经功能评分升高(氏O．05)。TTC染色结果显示正常对照组和假手术组大鼠脑组织无白色梗死灶；MCAO组可见右侧大脑半球大面积白色梗死灶。2WesternBlot显示脑梗死6小时MCU、MICUl呈上升趋势，至梗死后12小时，MCU、MICUl表达量达高峰，Cleaved．caspase3表达在脑梗死后3、

9、6、12小时升高显著(氏