ankrd23与长非编码rnaak004293对肌细胞分化相关基因的表达调控

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1、优秀毕业论文华农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文1．5应用的生物信息学网站及分析软件．171．6载体．182试验方法192．1细胞培养．192．1．1细胞的复苏．．192．1．2C2C12细胞的增殖培养192．1．3C2C12细胞的分化培养192．1．4细胞的冻存．．202．2C2C12细胞总RNA的提取和cDNA的制备202．3AK004293超表达载体的构建212．3．1小鼠AK004293cDNA的克隆2l2．3．2琼脂糖凝胶电泳和成像．．232．3．3PCR产物的胶回收和克隆测序．．232．3．4质粒提取．．252．3．5pcDNA3．1一AK

2、004293真核表达载体的酶切鉴定．252．4ANKRD23超表达载体的构建252．5AK004293．siRNA干涉片段的选取262．6脂质体介导的细胞转染(6孔板)262．7Quantitativereal．timePCR分析．．272．8Westernblotting分析．282．8．1蛋白提取282．8．2BCA蛋白浓度测定．．282．8．3SDS．PAGE电泳．282．8．4转膜．．292．8．5封闭292．8．6免疫反应292．8．7ECL化学发光检测．．29第四章结果与分析311ANKRD23与AK004293在成肌细胞分化过程中的表达变化．．31

3、II精品参考文献资料优秀毕业论文万方数据精品参考文献资料优秀毕业论文ANKRD23与长非编码RNA--AK004293对肌细胞分化相关基因的表达调控1．1RNA水平的表达变化3l1．2蛋白水平的表达变化312AK004293的干扰片段筛选．．323siRNA对AK004293基因的干扰效果及其对肌细胞分化标志基因表达的影响334pcDNA3．1．AK004293载体构建及其对肌细胞分化标志基因表达的影响344．1AK004293超表达载体的鉴定344．2超表达AK004293后肌细胞分化标志基因表达量的变化345siRNA对ANKRD23基因的干扰效果及及其对肌

4、细胞分化标志基因表达的影响366pcDNA3．1．ANKRD23载体构建及其对肌细胞分化标志基因表达的影响．．386．1ANKRD23超表达载体的鉴定．．386．2超表达ANKRD23后肌细胞分化标志基因表达量的变化38第五章讨论．401关于ANKRD23及与其3’UTR重叠的IncRNAAK004293之间的关系402关于RNAi技术413关于干扰和超表达ANKRD23对成肌细胞分化的影响4l4下一步计划42d、结．43参考文献44致谢5lⅡI精品参考文献资料优秀毕业论文万方数据精品参考文献资料优秀毕业论文ANKRD23与长非编码RNA--AK004293对肌

5、细胞分化相关基因的表达调控摘要肌纤维形成是一个复杂过程，受到多种蛋白编码基因和非编码RNA的精细调控。在本实验室前期研究结果基础上，我们获得了一个在骨骼肌高表达的lncRNA．AK004293，该IncRNA与ANKRD23基因3’UTR重叠。本研究利用RNA干扰技术和超表达技术在C2C12成肌细胞中研究了lncRNA．AK004293对ANKRD23表达的影响，以及这两个基因对肌细胞分化相关基因表达的影响。主要研究结果如下：1．采用实时定量PCR、Westernblotting技术检测了超表达和干涉AK004293基因后肌细胞分化相关基因MyoD、MyoG和M

6、yHC的表达变化及ANKRD23的表达变化；发现了AK004293对肌细胞分化相关基因与ANKRD23的表达都没有显著影响。2．采用实时定量PCR、Westemblotting技术检测了超表达和干涉ANKRD23基因后肌细胞分化相关基因MyoD、MyoG和MyHC的表达变化；发现干涉ANKRD23后增强了MyoD、MyoG和MyHC的表达，超表达ANKRD23后减弱了上述基因的表达，表明ANKRD23对肌细胞分化有负调节作用。本研究结果为进一步研究肌细胞中ANKRD23的功能及其调控机制奠定了基础。关键词：长非编码I斟A；ANKRD23成肌细胞分化；I斟Ai；超

7、表达精品参考文献资料优秀毕业论文万方数据精品参考文献资料优秀毕业论文华农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文AbstractMusclefiberformationisacomplexprocessandsubjecttofineregulationofavarietyofprotein-codinggenesandnon—codingRNA．Basedonourpreviousresults，weidentifiedalongnoncodingRNA(IncRNA)-AK004293whichwashighlyexpressedinmuscleandov

8、erlappedwith