甘蓝型油菜一个主效开花期qtl qftc2-1的精细定位

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1、华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文2．3．2极端早、晚花“DNA池"构建182．3．3Illumina测序文库构建．182．3．4测序数据序列比对及多态性分析212．3．5分子标记及PCR反应体系212．3．5PCR产物检测技术222．3．6田间分离群体和双亲的开花期调查．243结果与分析253．1F2群体田间开花期分析．253．2Inumina测序分析及开花期主效QTL的初定位263．3标记开发．283．3．1InDel标记开发．293．3．2SSR标记开发293．4标记筛选．293．4．1InDel标记筛选．293．

2、4．2SSR标记筛选313．5小群体分析．．323．6分离群体重组单株的筛选与QTL精细定位一344讨论364．1甘蓝型油菜开花期在育种中的应用364．2环境对甘蓝型油菜开花期的影响364．3BSA法结合高通量测序在QTL定位中的优势．37参考文献．．39致{射．45Ⅱ万方数据摘要油菜作为我国第一大油料作物，每年提供大量的食用油和饲料蛋白。但近年来，随着油菜与水稻、棉花等作物茬口矛盾的加剧，油菜种植面积大幅下降，导致冬季大量农田闲置。解决这一问题的关键是选育早熟油菜品种。大量的实验表明油菜开花期和成熟期呈显著正相关，研究油菜开花期对油

3、菜品种的早熟性改良具有重要意义。本研究以一个冬前稳长、年后快发的早花早熟油菜PolCMS恢复系R11及其晚花晚熟近等基因系R15为材料，通过分组混合分析法(BSA)与全基因组重测序(WGR)相结合的方法筛选到了一个与甘蓝型油菜开花期相关的主效QTL，并采用连锁作图的方法对该QTL进行了精细定位，为后续基因的克隆及本实验室核心亲本的早熟改良奠定基础。主要实验结果如下：1．2013年春，田间开花期调查结果表明：互为近等基因系(near-isogeniclines，NIL)的早花亲本R11比晚花亲本R15的开花期早9天，差异显著；其F2群体

4、的开花期整体呈正态分布，但有双峰呈现趋势，说明可能存在主效QTL影响开花期。2．通过对亲本R11、R15和F2群体早、晚花“DNA池"进行测序分析，将目标QTL初步定位在甘蓝C2染色体上0．1—3．1Mb的物理区间内。3．根据测序结果，在初定位区间开发了85对InDel标记，其中25对标记的标记基因型与F2极端早、晚花小群体的表型共分离；利用初定位区间对应的甘蓝序列开发了84对SSR引物，其中18对标记的标记基因型与F2极端早、晚花小群体的表型共分离。4．分离群体“F2．6”的田间开花期表型成明显的双峰分布，早、晚花比值符合1：3。推

5、测油菜开花期受一个主效QTL位点调控，并且晚花对早花为显性。5．利用物理位置最远的两个标记SSR22和SSR53，分析了3272个F2单株的标记基因型，共获得19个重组单株。进一步分析重组发生的位置并考察关键重组单株的后代开花期表型，将目标QTL精细定位到甘蓝C2染色体上2614287—2816205之间的202Kb区间内。关键词：甘蓝型油菜；开花期QTL；分组混合分析法；全基因组重测序；精细定位万方数据华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文AbstractRapeseedasthelargestoilcropsinChin

6、a,offersalotofcookingoilandfeedproteineveryyear．Butinrecentyears，theland-usecontradictionbetweenrapeseedandothercrops，suchasriceandcotton,ismoreandmoreserious，resultinginasignificantdecreaseinrapeseedcultivationandalotofidlefarmlandduringthewinter．Thekeytosolvetheproble

7、mistobreedearly-maturityvarietiesofrapeseed．Alargenumberofstudieshaveproventhatthereisasignificantpositivecorrelationbetweenthefloweringstageandthematurityofrapeseed．Therefore，itisimportantforearlymaturityimprovementthatstudyingthefloweringtimeofrapeseed．Thisstudytaking

8、anearlyfloweringtimeandearlymaturityBrassicanapuspolCMSrestorerlineR11whichhasstablegrowthbeforewinterandfastg