贵州凤岗富锌富硒绿茶对小鼠抗氧化抗衰老作用的讨论

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1、贵州凤岗富锌富硒绿茶对小鼠抗氧化抗衰老作用的讨论贵州为我国绿茶的主要省份，而凤冈产茶历史悠久。唐代茶圣陆羽在他撰写的世界第一部茶书《茶经》八之出中记述:黔中生思州、播州、费州、夷州，往往得之，其味极佳。据考证，夷州治所就是今凤冈县绥阳镇。宋代《华阳国志》中平夷产茶蜜，乐史《太平寰宇记》夷州、播州、思州以茶为贡和清代《梅移随笔》龙泉产云雾芽茶，色味双绝中的夷州、思州、龙泉都是指今凤冈一带。最新科学研宄表明，富锌富硒绿茶中所含有的天然物质成分对防衰老、防癌、抗癌、杀菌、消炎等均有特殊效果，为其他茶类所不及P1。笔者通过测定肝脏组织中SOD和

2、GSH-Px的mRNA及•其蛋白质表达水平，研究富锌富硒绿茶对D-半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠的抗氧化、抗衰老作用，为贵州特色茶叶产业的发展和推广提供营养保健的基础数据。1材料与方法1.1试验材料和仪器1.1.1动物。昆明雄性小鼠70只，体秉（18〜25g），购自贵阳医学院动物中心（合格证:10000S38）。1.1.2药物。供试富硒富锌绿茶由贵州风冈县永安镇田坝村所产，2013年春季采摘。经贵州省山地研宄所测试中心测定，该绿茶含锌、硒含量分别是65.47±0.02、1.74±0.02mg/kg。按茶水比为2g

3、：20ml的比例，用沸水冲泡30min制成茶水，过滤，为高浓度组;稀释1倍过滤后为中浓度组;再量取等体积水稀释，过滤后为低浓度组;普通绿茶泡制方法同前;维生素C片剂，用浓度0.9%生理盐水配制成50g/ml溶液。1.1.3试剂。D-半乳糖由上海恒信化学试剂厂生产;动物组织总RNA提取试剂盒（天根，批号DP121221）;Thermo试剂盒（Fermentas公司）;6DNA电泳LoadingBuffer上样液（天根，批号BC110413）;溴化乙锭（EB）溶液（天根，批号BC120227）;DNAmarker（北京康为世纪生物科技有限公

4、司生产，批号CED;BAC法蛋白定量试剂盒（上海捷瑞生物工程有限公司）;兔抗小鼠SOD-1多克隆抗体（SantaCruz公司，批号sc-11407）;兔抗小鼠GSH-1多克隆抗体（SantaCruz公司，批号sc-292189）;辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG（SantaCruz公司，批号sc-2004）。1.1.4仪器。凝胶成像分析仪（美国Bio-Rad公司），酶标仪（美国Bio-Tek公司），电泳仪（美国Bio-Rad公司），3kl5高速冷冻离心机（德国Sigma公司），T148050-900型PCR仪（德国Biometra公司

5、），水平电泳仪（美国伯乐BIO-RAD公司），Dolphin-Doc凝胶成像系统和Dolphin-ID软件（美国P200A型电子天平（上海良平仪器厂），电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂），Morris水迷宫（中国医学科学院药物所），动物运动轨迹记录分析系统（普升科技有限公司），HPLAS-2000计算机图像分析系统（无憾千屏公司）。1.2试验方法1.2.1动物衰老模型的构建。用浓度75%乙醇消毒小鼠下腹部，用D-半乳糖（0.2mg/g小鼠体重）腹腔注射，连续14d，诱发袞老模型，之后连续28d每日给予相同剂量以维持衰老模型。空白组小鼠注

6、射浓度0.9%生理盐水（0.1ml/10g小鼠体重），给药方法同模型组。1.2.2行为学测试（游泳水迷宫试验）。在连续灌胃21d后，采用环形水池。水池中放一低于水面1cm左右的逃避平台。模型小鼠预先训练4d，每次取1、2、3、4四个象限入水点背对站台放入水池。若小鼠在60s内找到平台，则使其停留15s;若60s内未找到平台，则将其诱导到平台上，并停留15s方结束一次训练。连续训练4d，在第5天进行行为学测试，其检测指标有:定向航行试验，测定每只小鼠从放入水中开始到跳到逃避平台时的时间，即逃避潜伏期;空间探索试验，测定每只小鼠穿越平台区所

7、用时间及穿越站台次数。1.2.3分组与给药。小鼠分为空白组、衰老模型组、普通绿茶组、富锌富硒绿茶（高、中、低剂景）组、m性对照组（维生素C片），每组10只小鼠。给药方案为:给予D-半乳糖（0.2mg/g）14d后，普通绿茶组给予普通绿茶茶水灌胃;富锌富硒绿茶组按照高、中、低浓度进行灌胃;模型组、空白组给予等容积蒸馏水灌胃;阳性对照组灌胃lg/L维生素C溶液，1次/d，连续给药28d。1.2.4小鼠肝脏组织SOD、GSH-Px蛋白质表达水平的检测。提取肝脏组织总蛋白，取少量上清液进行蛋白定量，余下-20°C保存备用，制胶，然后取20&mu

8、;l蛋白质样品加上样缓冲液，煮沸变性后进行SDS-PAGE电泳;电转移至PVDF膜;用含浓度5%脱脂奶粉的TBST振荡封闭2h;分别加入适量一抗4°C封闭过夜，次H以TBS-T洗膜3次，每次10min;加二