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《酿酒葡萄品种ssr-pcr体系的优化与建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、酿酒葡萄品种SSR-PCR体系的优化与建马文瑞邹弯魏玉洁严密全莉王雪薇高林龙马静武运薛洁业研宄院摘要：以酿酒葡药品种为原料，研究了聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)体系的主要成分对葡萄简单序列重复(simplesequencerepeats,SSR)扩增结果的影响，并确定了各成分的最佳用量。以改良的十六烷基三甲基溴化铵法(hexadecyltriraethylammoniumbromide,CTAB)从葡萄中提取基因组DNA,通过单因素试验分析SSR-PCR体系中主要成分Mg2'浓度、dNTPs浓度、Ta
2、qDNA聚合酶浓度、引物浓度和模板［)NA浓度对葡萄SSR-PCR反应体系扩增效果的影响。同时，采用正交优化设计试验确立酿酒葡萄SSR-PCR最佳25uL反应体系为lg2+浓度为2.5mmol/L,dNTPs为0.15mmol/L,TaqDNA聚合酶为1.5U,引物为0.5umol/L,DNA含量为40ng/25uL。通过优化试验的直观分析和方差分析得出PCR体系的主要成分对扩增结果的影响程度依次为:Mg2+>TaqDNA聚合酶〉dNTPs〉引物〉模板DXA。利用此体系对4个酿洒葡萄品种DNA进行SSR-PCR反应体系扩增并进行非变性聚丙烯
3、酰胺凝胶电泳检测，结果扩增条带清晰稳定，说明该体系可用于酿酒葡萄品种SSR标记的研宄。关键词：酉良洒葡葫品种;简申•序歹值复(simplesequencerepeats,SSR);单因素;交优化设计；作者简介：马文瑞，在读硕士研究生，研宂方向为食品生物技术。E-mail:1581412185@qq.com作者简介：武运，硕士，教授，研究方向为食品生物技术。E-mail:764630324@qq.com作者简介：薛洁，博士，教授级高级工程师，研究方向为食品生物技术。E-mail:825728388@qq.com收稿日期：2017-09-12基金
4、：新疆维吾尔自治区重大科技专项(2017A01001-2)EstablishmentandOptimizationofSSR-PCRSystemofVitisviniferaMAWen-ruiZOUWanWEIYu-jieYANMiQUANLiWANGXue-weiGAOLin-longMAJingWUYunXUEJieDepartmentofFoodscienceandPharmacy，XinjiangAgricultureUniversity;ChinaNationalResearchInstituteofFoodandFermentat
5、ionIndustries;Abstract：Vitisviniferawasusedastherawmaterial,andtheeffectofthemaincomponentsofpolymerasechainreaction(PCR)systemonthesimplesequencerepeats(SSR)amplificationofvitisviniferawasstudied,andtheoptimumdosageofeachfactorwasdetermined.TotalDNAextractionofGrapebyimpro
6、vedhexadecyltrimethylammoniumbromide(CTAB)extractionmethod,throughthesinglefactorexperimentstoanalyzetheinfluenceofSSR-PCRamplificationeffectsofmaincomponentsofMg2*andSSR-PCRindNTPssystem,TaqDNApolymerase,primersandthetemplateofthevitisviniferaDNA.Atthesametime,theSSR-PCRop
7、timal25uLreactionsystemoptimizationforestablishmentofvitisviniferaorthogonaltestforMg2+concentrationof2.5mmol/L，dNTPsconcentrationof0.15mmol/L,TaqDNApolymeraseconcentrationof1.5U,primersconcentrationof0.5umol/L,DNAconcentrationof40ng/25uL.ThemaincomponentsofPCRsystemwereobt
8、ainedbythevisualanalysisandvarianceanalysisofoptimizationexperiments.Theinfluenced
