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时间:2018-12-09
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1、关于柱层析和TLC之我的体会(转载)层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。这两项技术掌握与否,対于捉高实验的效率至关重要。常见的例子是:在柱层析时,由于层析柱屮的硅胶填料装得不均匀(没有填严实),使得柱了在淋洗过程屮就因为岀现太多气泡变花,导致分离效果不好。更常见的例子是:层析柱虽然装得不错,但是由于淋洗剂选择不恰当,结果导致儿十毫克产品,用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。分离同样的东西,熟手可能只需要半个小吋,而一个层析技术不过关的人町能半天都不能得到纯品。由此可见,这两项技术掌握
2、与否,对于捉高工作效率,减轻工作量,减少有机溶剂的使用,从而对身心健康和坏境保护都有明显的作用。柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。而淋洗剂的选择则是通过TLC确定。这里婆指出的一点是:TLC的作用除了跟踪反应进程,检测试剂和原料纯度外,一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。首先谈柱层析:装柱了(添硅胶)时,有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣。不论干法还是湿法,硅胶(固定相)的上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)的高度一般为15cm左右,太短了可能分离效果不好,太长了也会由
3、于扩散或拖尾导致分离效果不好。湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂“走柱子”,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。干法装柱则是肯接往柱了里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱了两侧,至硅胶界而不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用汕泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂“走柱子”,一般淋洗剂是釆用TLC分析得到的展开剂的比例再稀禅一倍后的溶剂。通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度。十法装柱较方便,但最大的缺陷在于“走柱子”时,由于溶剂
4、和硅胶之间的吸附放热(可以用手摸柱子明显感觉到),容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙讎,二氯甲烷更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是,一旦撤去压力,如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来,严重吋,整个柱子变花,样品不可能平整地通过,当然也就谈不上分离了。解决的办法是:第一、硅胶一定要天结实;第二、一定要用较多的溶剂“走柱了”,一定要到柱子的下端不再发烫,恢复到室温后再撤去压力。也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂,防止添加溶剂的时候,使得样品层不再整齐。但我的感觉是
5、如果小心上样,添加溶剂,则没冇这个必要。上样也冇干法和湿法之分:干法就是把待分离的样品用少最溶剂溶解后,在加入少最硅胶,拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。T法上样较麻烦,但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂(最好就是展开剂,如果展开剂的溶解度不好,则可以用一极性较人的溶剂,但必须少量)将样殆溶解后,再用胶头滴管转移得到的溶液,沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量溶剂洗涤后,再加入。湿法较方便,熟手一般采用此法。上样完毕后,接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开
6、剂的比例再稀释一倍后的溶剂。山于层析柱和薄板的不同,即使两者使用的硅胶都和同,但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时,也显得极性偏大,所以耍稀释一倍,但又不能稀释太多,否则成了靠扩散作用来分离,效果也不会好。接下來谈TLC,需要切记的是:笫一、某种样品在这种展开剂屮只显示一个点,并不等于在別的展开剂中也只显示一个点。因此在寻找展开剂时,多尝试几种比例不同,成分不同的展开剂。展开剂的极性太小,点分不开,极性太人,也分不开•一般以目标产物的Rf值在0.3左右为最佳。第二、点不能点得太浓,否则容易重叠,不
7、易判断,因为如果两个点相近的话,一浓就变成一个点了。第三、板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关,只有两者比较合适了,才能有一个交好的分离效果。选择适当的展开剂是首要任务•一般常用溶剂按照极性从小到人的顺序排列人概为:石汕迷V己烷V苯V乙瞇vTHFv乙酸乙酯v丙酮V乙醇V甲醇使用单一溶剂,往往不能达到很好的分离效果,往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂,高极性的溶剂还有增加区分度的作用,常用的溶剂组合有:Petroleumether/Ethylacetat
8、e,Petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,Petroleumether/CH2CI2,CH2O2/ethylacetate,ethylacetate/MeOH,CHO3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试•一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好的展开剂。很多吋候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成來达
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