利用单倍体诱导技术进行西葫芦抗wmv种质创新分析

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1、．㈣一ADissertationSubmittedtoUsingtheHaploidInductionTechnologyZucchiniWMVResistantGermplasmlnnovationCandidate：SunSongsongSupervisor：WangJianshuAcademicDegreeAppliedfor：MasterofAgricultureSpecialty：AgriculturalextensionCollege／Department：SchoolofAgronomyHebeiUniversityofEngineeringMaM20

2、15万方数据独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑i垦墨壁基鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：狲签字日期：pfy．年厂月／日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑i垦王猩盘堂有关保留、使用学位论文的规定。特授权塑i堡墨猩盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有

3、关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档。(保密的学位论文在解密后适用本授权说明)学位论文作者签名：i枞签字日期：枷出／年{具1日导师签名：蝴、签字日期易r厂年厂月∥日签字日期易rJ年∥月子日万方数据摘要摘要利用单倍体培养技术可以快速纯合育种中间材料，获得遗传稳定的自交系，节约育种时间与工作量，提高育种速度与效率。本研究分别以五种基因型的西葫芦一代杂交品种为试材，进行未受精子房切片和胚珠的诱导培养，以期建立西葫芦单倍体诱导体系。研究结果表明：再生植株率因基因型的不同而有差别，不

4、同培养基对胚状体的诱导作用差异明显，添加物的种类不同其胚状体诱导率不同，添加水解酪蛋白和酵母提取物的培养基诱导率最高。添加物的浓度对胚状体诱导率也存在显著影响，其中添加水解酪蛋白的培养基胚状体诱导形成再生植株的能力较高，诱导率可达66．7％，但是单倍体诱导率仅为2．1％。用气孔保卫细胞叶绿体计数法和流式细胞仪分析法进行再生植株倍性鉴定，结合特异的EST-SSR标记对再生植株中的单倍体或自然加倍单倍体植株进行了快速鉴定分析，共获得了15株单倍体植株。试验还通过植株型态学观察法对再生植株进行倍性鉴定分析。西瓜花叶病毒(wMV)是葫芦科作物的主要病害之一。目前对该病毒还没

5、有好的预防措施。培育新品种是保障西葫芦生产安全的有效方法，但是目前西葫芦抗WMV病毒的品种很少。利用分子标记辅助选择育种可以加快育种进度，提高选择的准确性。西葫芦分子标记育种起步晚，可利用的标记数量少。本试验结果表明：西葫芦抗WMV病毒是由显性单基因控制的。利用574对SSR及EST-SSR分子标记将该抗病基因遗传定位在一个小的连锁群上，其中，标记SSRMl37与WMV抗病基因遗传距离最近，其遗传距离为1．37cM。利用回交转育技术得到西葫芦抗WMV病毒的纯合植株的周期长，但结合单倍体诱导技术对抗WMV的再生植株进行基因纯化，可以大大缩短育种年限，为西葫芦抗病种质创

6、新奠定了基础。关键词：西葫芦；未受精子房；胚珠；单倍体；分子标记；遗传分析万方数据AbstractAbstractHaploidculturetechniquesCallbeusedtoquicklyhomozygousbreedingintermediatematerial，tOobtainthegeneticstabilityofinbredlines，savebreedingtimeandworkload，improvethebreedingspeedandefficiency．Fivesquashgenotypes(XHO1，XH02，XH03，XH04an

7、dXH05)wereusedastestmaterialsinthisstudy,andtheunfertilizedovarybiopsyorovuleindependentlywereculturedindifferentmediumsinordertosetupefficientsquashhaploidinductionsystem．Theresultsshowthattheratedifferentforgenotypesvary，thehighestrateofmaterialsforXH05，thesecondwasXH04，andthewestw