传染性法氏囊病毒感染鸡靶器官的比较蛋白质组分析

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1、、wDifferentialProteomeAnalysisonTargetOrganofChickensInfectedwithVirulentInfectiousBursalDiseaseVirus。I巴}一ADissertationSubmittedinfulfillmentofrequirementsforthedegreeofDoctorofPhilosophyPreventiveVeterinaryMedicineCollegeofAnimalSciencesZhejiangUniversityHangzhou，

2、P．R．China枣啊I‘July,2009、∞∥．，」、，电扪-fl飞A霄，‘浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝婆盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：殳签字日期：≯矿哆年，．，月／9日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝姿苤鲎有权保留并向国家

3、有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝望盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。．(保密的学位论文在解密后适用本授权书)，一学位论文作者签名：寸彳导师签名：签字日期：五1年，口月，口日签字日期：年月日，。$'ι『J浙江大学博士论文(2。。9年)单位代码：10335研究生学号：10617035传染论文答辩答辩一本研究获得以下项目资助：4■●●1一●●■¨l●●●¨5技术路线。6第一部分文献综述7第一章传染性法氏囊病毒

4、的研究进展71．1IBDV的一般生物学特性．．71．2IBDV的基因组结构．91．3IBDV的病毒蛋白及其功能111．4IBDV的抗原和毒力变异191．5IBDV的复制和繁殖221．6IBDV诱导细胞凋亡261．7IBDV引起的免疫抑制27第二章差异蛋白质组学在病毒感染中的应用。292．1差异蛋白质组学概述．292．2差异蛋白质组研究常用的蛋白分离技术30‘2．3差异蛋白质组研究中的蛋白质鉴定技术。3l2．4蛋白质组生物信息学．362．5差异蛋白质组学研究在病毒感染研究中的应用．372．6结语和展望。40第二部分研究内容。4

5、2第一章法氏囊组织二维凝胶电泳样品制备方法的优化．．42l材料与方法431．1试剂和材料．431．2设备．．4J41．3方法．44jj多2．结果52々‘2．1鸡法氏囊组织蛋白抽提方法的优化522．2鸡法氏囊组织样品裂解液的优化53》2．3不同pH范围IPG胶条的选择562．4冻存IEF后的IPG胶条对二向SDS．PAGE胶分离效率的影响．56专’2．5优化的鸡法氏囊组织的2-DE样品制备方法用于提取鸡脾脏和胸腺蛋白57-2．6重复性试验．583．讨论．．．58第二章IBDV感染鸡法氏囊的蛋白质组学分析6l1．材料与方法：62

6、1．1试剂和材料．62J飞l'1．2设备．631．3法氏囊标本和病毒．．631．4试剂．631．5试验设计．631．6样品制备及二向凝胶电泳．641．7凝胶染色、图像采集与分析．641．8差异表达蛋白点的MALDI．TOF鉴定．661．9MALDI．TOF／TOFMS分析和数据库检索67■L1．10差异蛋白在法氏囊组织中的转录水平分析671．11差异蛋白在法氏囊组织中的表达水平分析702．结果702．1IBDV感染鸡法氏囊组织的2-DE凝胶图谱．702．2IBDV感染鸡法氏囊组织的蛋白表达差异分析732．3差异表达蛋白的质谱

7、鉴定．752．4差异表达蛋白的分类882．5差异表达蛋白在法氏囊组织中的转录水平分析．912．6差异表达蛋白质的Westernblot验证933．讨论943．1IBDV感染和细胞骨架蛋白．953．2IBDV感染和细胞应激反应953-3IBDV感染破坏了宿主的翻译机制963．4IBDV感染对UPP通路蛋白的影响。973．5IBDV感染和RNA加工、大分子生物合成和能量代谢的抑制．983．6IBDV感染和膜联蛋白II．993．7未知功能蛋白．993．8差异表达蛋白的转录水平分析。993．9差异表达蛋白的表达水平分析100参考文献

8、．：．101附录．．．．121常用缓冲液及培养基配方121攻博期间发表或录用的学术论文129致谢．130111论文创新点1．通过筛选、优化样品裂解液、样品抽提方法、IPG胶条，建立了获得高质量2-DE图谱的样品制各方法。2．借助差异蛋白质组学方法首次对IBDV感染鸡法氏囊组织蛋白的动态表达