芽孢杆菌的生防菌株筛选及其抑病机理

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1、独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位(毕业)论文作者亲笔签名：如确日期：'咿。夕一口了一如论文使用授权的说明本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借

2、阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。不保密，本论文属于不保密。学位(毕业)论文作者亲笔签名：砻丝铂日期：砷。小b徇峪吣＼厶C■一。指导教师亲笔签名：日期；一or，'S一福建农林大学博士学位论文摘要本研究从感染根结线虫的番茄根系中分离到46个细菌菌株，NA平板初筛获得13个抑制青枯雷尔氏菌生长的拮抗菌株，其抑菌圈宽度达7．1～26．3mm，同时测得其中12个菌株对多种植物病原真菌有不同程度的抑制作用。温室试验表明，菌株EN5、ENl5

3、、ENOI和ENl6对青枯病的于帝病效果最为显著，平均防效分别为70．82％、89．54％、85．38％和78．81％；而EN5、SWl和SB2能有效降低番茄根结线虫病的根结指数，抑病效果均达49％。同时测定了这些菌株对青枯病菌一根结线虫复合病的防治效果，结果表明，EN5、SWl和SB2能显著降低复合病害的病情指数，其中SWl的防效最佳，青枯病指数比对照下降56．66，根结指数降低5．2l。自然土中重复测定EN5等7个菌株对青枯病和复合病害的抑病作用，其中菌株EN5、ENl6、SWl和SBl的抑病效果较为稳

4、定。通过形态和生理生化特征初步鉴定，菌株EN5、ENl5、EN01、SBI、SB2和SWl等6个菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtills)，而ENl6为短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)；16SrDNA序列分析进一步确定菌株EN5为枯草芽孢杆菌内生亚种(B．subtilissubsp．endophyticus)。对菌株EN5、ENl6、SWl和SBl防治番茄青枯病的作用机理进行分析，结果表明，菌株EN5处理番茄后20d，在番茄根茎部有较高定殖量(达3．60×104efu／g·FW)，

5、该菌株胞外液无抗菌活性，其抑病效果仅13．56％，菌体抑病效果则高达71．19％，因此推断其作用机理是以菌体的定殖竞争作用为主；菌株SBl胞外液的抗菌活性相当显著，其抑病效果达50．85％，而定殖力明显弱于其他三个供试菌株，诱导试验中防效较差，由此推测其抑病作用主要依赖于胞外液的抗菌活性；SWl和ENl6胞外液的抑病效果分别为22．03％和27．12％，远低于其菌体的抑病作用，同时两菌株具有较好的定殖力，说明抑病作用与其菌体的定殖力有关，此外，诱导抗性试验表明两菌株能有效地诱导番茄抗青枯病，诱发过氧化物酶(

6、POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)等抗病相关性酶活性的显著增强，因此，诱导抗性是它们的主要抑病机制之一。以电镜观察法进一步分析菌株EN5在番茄根茎组织中的分布，结果显示，EN5主要分布于主根基部及茎部的韧皮组织、细胞间隙等部位。盆栽试验分析EN5菌株在不同土壤条件、不同接种方式及不同作物中的定殖力，结果表明，菌株EN5在自然土和灭菌土条件下均能稳定地定殖于番茄植株；浸种、浸根和灌根处理条件下，以灌根法的定殖效果最佳；在番茄、烟草和黄瓜体内均可定殖，其中在番茄和烟草体内的定殖量较大。菌株

7、EN5对番茄体内及土壤中微生物种群影响的测定结果表明，EN5处理后，植株内3类主要微生物种群数量明显减少，丽土壤中微生物种群在处理初期有所减少，处理后期则多数微生物群体，尤其是氨化细菌、固氮菌等生理微生物群体福建农林大学博士学位论文2数量显著增多，此外，ERIC．PCR结果也表明，EN5的处理还对根围土中微生物的种类产生一定的影响。菌株ENl6和SWl灌根处理后2～10d内挑战接种青枯病菌，均能有效诱导番茄对青枯病的抗性，其中以间隔期为7～10d诱导效果最好，与此结果相符的是，POD、PPO和PAL的酶活力

8、在7-10d时也达到较高值。以灌根和浸种法接种菌株ENl6和SWI，灌根处理可有效诱导番茄产生抗病性，浸种处理诱导效果较差。盆试测定菌株SWl和ENl6对烟草花叶病毒病的诱导效果，结果表明，菌株SWl的诱导效果优于菌株ENl6；病程相关蛋白结果进一步说明菌株SWl可以诱导烟草叶片中多种PR蛋白的大量积累，其诱导蛋白谱与乙酰水杨酸的有较大一致性，而ENl6诱导后PR蛋白积累量较小，与乙酰水杨酸的不完全相同。诱变试验