干细胞脑移植大鼠脑损伤模型的制作探讨

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1、干细胞脑移植大鼠脑损伤模型的制作探讨李会忠廖联明张国锋林海黄眉飞吴杨龙(福建中医药大学附属第二人民医院350003)【摘要】目的在造成大鼠脑损伤的基础上探讨制作有固定偏瘫症状大鼠模型的方法，为干细胞脑移植实验提供脑损伤后神经功能障碍的动物模型。方法使用清洁级重200〜250g的成年Wistar大鼠，每组5只，对其脑运动区本别采取针刺毁损、骚刮毁损和挖除毁损的方法，逐渐加重大鼠脑运动区皮层损伤程度，观察大鼠脑损伤后运动障碍的表现与稈度。结果针刺毁损和骚刮毁损大鼠脑运动区的大鼠麻醉返浅后，脑损伤的对侧肢体有轻度运动障碍，麻醉完全清醒24小时后，运动障碍症状完全消失；挖除法毁损脑运动区

2、大鼠麻醉返浅后，可有一过性脑损伤的对侧肢体偏瘫，但48小时之后4只毁损皮层对侧肢体肌力明显恢复，“绕圈”行为消失，另外1只的运动障碍在5天后消失；术后15天处死大鼠，大鼠脑运动区部分缺损清晰可见。结论大鼠脑损伤模型容易得到，但要制作有固定偏瘫症状的大鼠模型I•分困难，这样的结果可能与大鼠对侧皮层的代偿能力、较强的小脑平衡能力及视觉代偿行为能力有关，因此要得到理想的脑损伤后有固定偏瘫症状的大鼠模型还需要进行进一步探讨。【关键词】Wistar大鼠脑损伤模型运动功能障碍【中图分类号】R322.8【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2012)18-0092-02近年来，对脑损

3、伤动物进行干细胞脑移植以促进神经功能恢复的实验逐渐增多，其中，脑损伤动物模型的制作至关重要，典型的脑损伤模型是Feeney’s以自由落体打击大鼠脑部制作的脑损伤模型[1],高燕等对Feeney’s装置进行改良后制作大鼠脑损伤模型也取得了有效的结果[2],我们在制作脑损伤大鼠模型的实践中发现，大鼠颅脑损伤模型容易制作，但是要得到有固定偏瘫症状的大鼠模型十分困难。现将有关结果报告如下：1.资料与方法要制作脑损伤后有固定偏瘫症状的大鼠模型，必须对大鼠脑皮层运动区进行毁损。大鼠脑立体定向研究确定的运动区是在其前囱前3.7mm至前囱后3.6mm的范围[3],运动区的

4、额端由脑半球中线向外侧比较宽阔向枕端逐渐接近中线（见图1、图2）,由于前囱所处位置正是冠状缝的位置，所以大鼠脑运动皮层的体表投影是冠状缝前3.7mm至冠状缝后3.6mm.前部宽阔、后部靠近中线的近似于三角形的区域。Feeney’s和高燕等所取脑损伤部位是以冠状缝后1.5mm、中线旁2.5mm为中心，磨开直径5mm左右的骨窗，这个骨窗的位置与大鼠脑立体定向确定的大鼠脑运动皮层的体表定位基本吻合。我们制作动物脑损伤模型使用的是清洁级重200〜250g的成年Wistar大鼠，每组5只。人鼠颅骨开骨窗的位置与自由落体脑损伤的骨窗位置、面枳相同，取右侧（见图3、图4）。在进行自

5、由落体大鼠脑外伤模型的制作过程中，以重锤打击便脑膜之后,没有观察到大鼠四肢肌张力增高和呼吸暂停现象，大鼠从麻醉中清醒后，也没有出现偏瘫症状和“绕圈”行为。因此，我们直接进行大鼠脑运动皮层毁损实验。为了得到有固定偏瘫症状的大鼠模型，我们逐渐加重人鼠脑运动区皮层损伤程度,分别采取了针刺毁损、骚刮毁损和挖除毁损的方法，具体方法是:⑴针刺毁损开骨窗后，以无菌注射器针头在选定区域进行深度为3mm的多点针刺，压迫之血后缝合头皮。五只实验人鼠均成活。⑵骚刮毁损：由于针刺毁损不能得到偏瘫人鼠模型，我们加大对大鼠脑运动皮层毁损程度，采用了运动皮层骚刮毁损；开骨窗后，剪开駛脑膜，以无菌注射器针头在选

6、定区域进行平面骚刮，深度约为2mm,压迫之血后局部贴覆小块止血海绵，缝合头皮。五只实验大鼠均成活。⑶挖除毁损：由于针刺毁损和运动皮层骚刮方法均没能得到偏瘫大鼠模型，我们采用了大鼠脑运动皮层挖除毁损；开骨窗后，剪开硬脑膜，以自制的直径5mm皮层切除器，将选定区域运动皮层挖除约直径5mm＞深度5mm体积。压迫之血后局部贴覆小块止血海绵，缝合头皮。实验中有一只大鼠死亡，再以同样方法补做一只。2.结果针刺毁损组：待人鼠麻醉返浅后，刺激其肢体，可见脑损伤的对侧肢体反应迟钝、冋缩动作幅度小于对侧；但是麻醉完全清醒后，活动时四肢肌力无明显差别，第二天全部实验大鼠走横木实验评分显示正常。搔刮毁损

7、组：待大鼠麻醉返浅后，刺激其肢体，可见脑损伤的对侧肢体反应迟钝、冋缩动作幅度小于对侧，身体向脑损伤侧弯曲；麻醉完全清醒后，活动吋脑损伤对侧肢体活动较少,但24小吋之后四肢肌力恢复至相同。第二天全部实验大鼠走横木实验评分亦为正常。挖除毁损组：待大鼠麻醉返浅后，刺激其肢体，可见脑损伤的对侧肢体受疼痛刺激没有冋缩反应，身体向脑损伤侧弯曲。麻醉完全清醒后，活动时脑损伤对侧肢体活动度及稳定性差于对侧并出现“绕圈”行为，但48小时之后4只有运动障碍侧肢体肌力明显恢复，“绕圈”行为消失，另外一