neuropilin1过表达转基因绒山羊模型的建立及其相关次级毛囊信号通路的研究

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1、内蒙古大学硕士学位论文白绒山羊转基因体系的完善及相关动物模型的建立提供了实验依据。2．NRP．1相关次级毛囊信号通路的研究由于阿尔巴斯白绒山羊生长周期较长，在建立NRP．1过表达阿尔巴斯转基因白绒山羊过程中，同步研究了NRP．1在次级毛囊中的信号通路。在次级毛乳头细胞中利用NRP．1沉淀与NRP．1相互作用的蛋白，通过SDS．PAGE电泳进行蛋白分离。经过考马斯亮蓝染色观察蛋白条带，利用蛋白质质谱分析检测的方法鉴定蛋白的结构。通过查阅文献和数据库分析，得到Prdx2和CAT是有可能与NRP．1相互作用的蛋

2、白。通过哺乳动物双杂交系统确认NRP．1与Prdx2存在相互作用的关系。并运用荧光实时定量PCR联合蛋白免疫印迹法确认NRP．1与Prdx2RNA与蛋白质表达量存在正相关关系。本实验在己知NRP一1对VEGF通路有影响的前提下建立了过表达转基因绒山羊模型的技术路线。初步探索了NRP．1在VEGF通路中的作用，筛选和鉴定了与NRP一1相互作用的蛋白，为与次级毛囊生长有关信号通路的作用机制研究提供了新的理论基础和实验依据。关键词：NRP．1；Prdx2；信号通路；绒山羊；免疫共沉淀万方数据内蒙古大学硕士学位论

3、文ProductionofTransgenicCashmereGoatofOverExpressionNeuropilin一1andIt’SSignalingPathway。SecondarySeconaaryHairHairOlllcleABSTRACTNeuropilin一1(Neuropilin-1．NRP一1)isatransmembraneglycoprotein．NRP一1，asanewtypeofcellsurfacereceptor，promotestheformationofbloodv

4、esselsbymediatingtheVEGFpathway．ExperimentalresultsshowthatNRP--1ismainlythroughtheVEGFR·-2pathwaytoincreasetheexpressionofVEGF．TheformationofbloodvesselswasinhibitedinthetransgenicmousemodelofknockoutNRP-1．Accordingtothetranscriptomesequencingdataofprima

5、ryhairfollicleandsecondaryfollicleinthelaboratory，wefoundthattheexpressionofNPR-1inprimaryandwas3．16timesthanthatinsecondaryhairfollicles．Basedontheabovephenomenaandtheory，thetechnicalrouteofNRP-1transgeniccashmeregoatmodelproductionwastoestablishedinthis

6、study，SOthattoobservethefunctionofNRP一1insecondaryfolliclegrowthanddevelopment．Meanwhilemassspectrometryanalysis，immunecoprecipitation，Westernbolt，fluorescencequantitativePCR，3万方数据内蒙古大学硕士学位论文mammaliantwohybridsystemetc．wereusedtofurtherexploretheNRP-1rela

7、tedsignalpathwayanditsfunctioninsecondaryfolliclegrowth．1．EstablishmentofNRP-1transgeniccashmeregoatmodel．NRP一1transgenicexpressionvectorwasconstructedandtransfectedintoAlpascashmeregoatfetalfibroblasts，andNRP-1overexpressedtransgenicAlpascashmeregoatembr

8、yoswereproducedbynucleartransplantationmethod．ResultsshowedthattheoverexpressionofNRP-1transgenicvectorwaswellconstructed，and33NRP-lpositivetransgenicmonoclonalcelllineswereobtained．Afternucleartransplantation，154tr