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《ITS鉴定木材种类：一例司法鉴定研究实例0710.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、研究报告ResearchReportITS鉴定木材种类：一例司法鉴定研究实例黄欣2周倩2,3雷湘华2高必达1,2,3*1湖南农业大学植物保护学院,长沙,410128;2湖南农业大学司法鉴定中心,长沙,4101283？？什么单位*通讯作者,bdgao@aliyun.com摘要：本研究选取一例非法收购国家重点保护植物油丹的司法鉴定案作为研究实例，在确认鉴定技术可行的前提下，应用ITS序列分析对待检测的原木做了分子鉴定。实验采用CTAB法提取原木DNA，对提取的原木DNA进行提纯，然后进行ITSrDNA的PCR扩增，再对P
2、CR阳性产物进行克隆、测序，将测序结果进行Blast分析、构建系统发育树等。研究结果表明，送检的47根原木中有9根鉴定为油丹。本研究采用ITS序列系统发育分析方法，成功鉴定了原木种类，为今后类似司法鉴定案件审理提供了可靠的鉴定意见。关键词：油丹,ITS序列,分子鉴定,司法鉴定IdentificationofPlantsbyITSSequencing:AJudicialCaseStudyHuangXin2ZhouQian2,3LeiXianghua2GaoBida1,2,3*1CollegeofPlantProctec
3、tion,HunanAgriculturalUniversity,Changsha,410128;2JudicialCenterofHunanAgriculturalUniversity,Changsha,410128AbstractSelectingonejudicialidentificationcaseofillegalacquisitionofAlseodaphne,aplantonthenationalprotectionlist,asanexample,thisstudy,inthepremiseoffe
4、asibleidentifyingtechnique,conductsamolecularidentificationontheobjectlogsusingITSsequenceanalysis.TheDNAoftheobjectlogsareextractedundertheCTABmethodandpurified,thenaPCRexpansionoftheITSrDNAisconducted.AfterwardsthePCRpositiveproductisclonedandsequenced,onthet
5、heresultsofwhichaBlastanalysisisdoneandphylogenetictreeconstruced.Theoutcomeshowsthat9ofthe47submittedlogsareAlseodaphne.Inthisstudy,thespeciesofthelogsaresuccessfullyidentifiedusingthephylogeneticanalysisofITSsequencefragmentwhichprovidesareliableexpertopinion
6、forsimilarforensicidentificationcasesinthefuture.Keywords:Alseodaphne,ITSsequence,Molecularidentification,Judicialidentification木材鉴定技术对于打击非法采伐、保护珍稀濒危种材、合理保护森林资源具有重要意义(姜笑梅等,2010)。为了更好地发挥木材鉴定技术在实际生产生活中的作用，近年来木材鉴定技术不断发展，特别是随着分子遗传学的发展，分子标记及DNA条形码技术逐渐成为一种物种辅助鉴定的工具，其
7、在木材鉴定中的作用越来越受到人们的重视。其中ITS序列分析在植物分类鉴定与系统进化中的应用越来越广泛(Finkeldeyetal.,2010)。ITS序列之所以在植物种类鉴定及分子系统学中得到广发应用，其主要原因为ITS1、ITS2分别位于18S-5.8SrDNA、5.8S-26SrDNA之间，而18S-5.8SrDNA、5.8S-26SrDNA的序列具有高度保守性，这样就可以用与它们序列互补的通用引物对ITS区进行PCR扩增、测序(赵玥等,2005)，为进一步的分子鉴定提供良好的实验基础。2012年，湖南农业大学司
8、法鉴定中心应海南省第一中级人民法院委托，对某非法收购国家重点保护植物油丹(Alseodaphne)案中47根原木样本进行司法鉴定。本研究在此应用背景下展开，运用ITS序列分子鉴定技术，成功鉴定了47根原木样本。1结果与分析1.1样品ITS序列PCR扩增结果经特异性引物PCR扩增得到9个油丹阳性样品（编号8、16、21、25、38、40、41、4
