基于srap技术的甜橄榄种质资源遗传多样性分析

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1、基于SRAP技术的甜橄榄种质资源遗传多样性分析张小红赵依杰林航福建省福州市农业科学研宄所摘要：从100条SRAP引物屮筛选出12条具有多态性谱带的引物，对福建省闽淸县17份甜橄榄种质资源进行SRAP分析。结果表明，12条引物共扩增得到72个位点，59个位点具有多态性，多态性比率为81.94%;17份甜橄榄种质资源的相似系数0.796°.987;其中，羊尿与小个子种质相似系数最高，为0.987。相似系数在0.846处，17份种质资源可分为两大类，胜利1号、羊屎、黄田、小箬、自来圆、山源1号和小个子为第一大类，其他为第二大类;进一步区分，在相似系数0.870处又可分为四类，第一类包括胜

2、利1号、羊屎、黄田、小箬、山源1号和小个子，第二类只有自来圆，第三类包括红脸、竹岐1号、长营、徳士，其他为第四类。关键词：橄榄;SRAP;亲缘关系;聚类分析;作者简介：张小红(1979—)，硕士，副研宂员，研宂方向为果树、瓜果品种选育与栽培生理。E-mail:ahjane@163.com作者简介：赵依杰(1970—)，硕士，研究员，研究方向为果树、瓜果品种选育与栽培。E-mail:zyjiel970@163.com收稿日期：2017-05-15基金：福州市科技攻关项目“优质鲜食甜橄榄山源1号的选育与推广”(2013-N-48)资助Received：2017-05-15橄榄是Cana

3、riumalbum(Lour.)Raeusch.橄榄科橄榄属乔木植物，为二倍体植物，染色体共46条。橄榄是福州特产，早在唐朝就被列为贡品。甜橄揽果实肉质脆嫩、纤维极少、汁多味甜、细嚼后余味无穷，有独特的药用价值和保健功能。橄榄在我W种植历史悠久，品种资源丰富，福州橄榄产地主要分布在闽江下游两岸，以闽侯、闽清两县的产量最多。闽清是橄榄重要的种植基地，但地方橄榄种植年代久远，技术落后，造成种性退化，分布零星，收集困难。因此利用分子标记对橄榄种质资源进行遗传多样性分析具有重要意义。对于橄榄种质资源的分析，己有利用RAPD、TSSR、AFLP等技术进行了遗传多样性分析［1-9］。SRAP具

4、有较高位点和多态性检测能力及操作简便、费用低等优势，克服了RAPD稳定性和重复性差的缺点，又克服了AFLP操作复杂、成本昂贵的缺点［10-11］。SRAP分子标记自2001年确立以后，被广泛应用于各种植物的物种遗传多样性分析、遗传图谱构建、重要性状标记及比较基因组学［12-14］。SRAP技术在橄榄上的应用0前有张平湖等采用L16(45)正交试验设计对橄榄品种SRAP扩培体系进行优化［15］,但是并未深入利用SRAP技术进行种质资源分类。闽清县橄榄产业巨大，种质资源背景不清，特别是甜橄榄资源的挖掘需要进一步深入。本研宄从闽清现有保存的鲜食橄榄种质资源中选取具有代表性的17份种质，釆

5、用SRAP技术进行遗传多样性分析，为甜橄榄品种分类鉴定、遗传育种研究及种质资源的有效保护和合理开发利用提供参考。1材料与方法1.1材料在福建省闽清县建立了橄榄种质资源圃，2014年10月9闩选取其中17份橄榄种质资源，分别为檀香、胜利1号、林峰、惠圆(野生)、羊尿、徳士、大目程、黄田、长营、小箬、梅埔2号、竹岐1号、自来圆、山源1号、码头种、小个子和红脸，依次编号为广17,其屮除自来圆、惠圆为鲜食加工两用橄揽品种外，其余品种为闽清现有保存的甜橄榄种质资源。选用无病虫害的嫩叶，洗浄并用液氮处理后，罝于-40°C冰箱保存备用。1.2方法1.2.1橄揽总DNA提取与检测采用改良的CTAB

6、法提取橄揽基因组DNA［16］,1.5%琼脂糖凝胶电泳检测其质量,紫外分光光度计分析检测其浓度，最后稀释标定到20ng/uL，放入-2(TC冰箱保存备用。1.2.2引物筛选引物采用和QuirosUZl已发表的引物,选上下游引物各10个进行两两配对,共产生100对引物组合。选用3个外观差笄较大的橄榄品种DNA进行引物筛选。1.2.3PCR反应及电泳SRAP反应体系参照柳李旺等的方法，反应在PCR仪上进行。试验采用20uL的SRAP扩增反应体系，包括0.2mmol/L的dNTP,1.5U的Taq酶,1.5mmol/L的Mg,蒸馏水14.7uL，DNA50ng,0.16Pmol/L的单条

7、引物上下游。扩增程序:94°C5min预变性;接着进入5个循环，包括94°C5min，35°Clmin,72°C1min;随之进入35个循环，包括94°Clmin,50°Clmin,72°Clmin;最后72°C延伸lOmin。扩增产物在1.8%琼脂糖凝胶上进行电泳检测，电泳缓冲液为1XTBR,采用DL2000DNAMarker作为标准分子量对照，电泳时间45min。完成电泳之后，放入到凝胶成像分析系统中观察拍照。1.3数据统计以上试验获得电泳图，釆用软件对其进行数据