大蒜素对肺癌耐紫杉醇细胞株a549taxol生长抑制的实验研究

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1、大蒜素对肺癌耐紫杉醇细胞株A549/Taxol生长抑制的实验研究作者：王浩等［摘要］FI的研究大蒜素对耐紫杉醇人肺腺癌A549/Taxol细胞增殖及凋亡的影响。方法采用CCK8法检测不同浓度大蒜素及大蒜素与紫杉醇联合应用后对A549/Taxol细胞增殖抑制率及紫杉醇IC50值。ELISA法测定细胞上淸液缺氧诱导因子-la（IIIF-1a）与血管内皮生长因子（VEGF）水平，比色法检测caspase-3、caspase-8活性变化。结果大蒜素对A549/Taxol细胞增殖有明显抑制作用（P〈0.05）,两药联合后紫杉醇IC50由861.61ug/ml下降至149.02ug/ml；随大

2、蒜素浓度增加，A549/Taxol细胞上清液HIF-la与VEGF水平呈下降趋势，caspase-8、caspase-3蛋0活化埔加。结论大蒜素能显著抑制A549/Taxol细胞增殖、诱导其凋亡，可能与1IIF-1a及VEGF表达下降及caspase-8、caspasc-3激活相关。［关键词］大蒜素；A549/Taxol细胞；耐药；紫杉醇［中图分类号］R734.2［文献标识码］A［文章编号］1674-4721（2013）09（c）-0013-03肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，其5年生存率仅为13%〜16%［1］。紫杉醇是肺癌治疗的一线化疗药物。但肺癌细胞对紫杉醇耐药常导致治疗失败

3、。研宂证实，大蒜素对肺癌等多种肿瘤均有显著的抗癌作用［2-3］，但其对耐药细胞影响的研宄甚少。本文H在观察大蒜素对体外培养耐紫杉醇细胞株A549/Taxol的生长抑制作用并探讨其作用机制。1材料与方法1.1试剂及材料大蒜素注射液为上海禾丰制药有限公司产品（批号为121208）；紫杉醇注射液为扬子江药业产品（批号为110910）；CellCountingKit_8购自口本同仁化学研宄所；11IF-Ia与VEGFELISA检测试剂盒购自南京凯基生物公司；caspase-3、caspasc-8活性检测试剂盒购自碧云天生物公司。1.2细胞培养A549/Taxol细胞由南京凯基生物公司提供，

4、用含10%小牛血淸及100ug/ml紫杉醇的RPMI1640培养液于37°C，5%二氧化碳及饱和湿度的培养箱培养，胰酶消化法传代培养，每周2〜3次。1.3CCK8法分别检测大蒜素及紫杉醇对A549/Taxol细胞増殖的影响取对数生长期A549/Taxol细胞，调整细胞密度1.0X105个/ml，取100U1接种于96孔板培养，细胞进入对数生长期后依次加入大蒜素终浓度为0、20、40、60、80ug/ml的RPMI1640培养基100ul;同法配置紫杉醇，终浓度分别为0、10、100、1000、2000Pg/ml,每组设5个复孔，孵育72h,每孔加入CCK8检测液10ul,酶标仪测定

5、450nm波长各孔0D值，计算细胞抑制率及IC50值。抑制率=(1-加药组A值/对照组A值)X100%。1.4两药联合应用对紫杉醇TC50值的影响根据1.3实验结果，向96孔板培养的A549/Taxol细胞中加入TC50值的大蒜素作用24h后，更换终浓度分别为0、10、100、1000、2000Ug/ml的紫杉醇溶液，培养72h，观察两药联合培养后A549/Taxol细胞紫杉醇TC50变化。1.5ELISA检测细胞上清液HIF-1a与VRGF含量取对数生长期A549/Taxo1细胞，调整细胞密度2.0X104个/ml，取3ml接种于24孔培养板，细胞进入对数生长期，依次加入大蒜素终

6、浓度为0、40、80ug/ml的RPMI1640培养,孵育72h后收集细胞上清液，BCA法检测蛋白浓度，根据ELTSA试剂盒说明分别测定缺氧诱导因子-1a(HTF-1a)与血管内皮生长因子(VRGF)蛋ft浓度。1.6比色法检测caspase~3>caspase-8活性取对数生长期A549/Taxo1细胞，调整细胞密度1.0X105个/ml，取5ml接种于6孔培养板，细胞进入对数生长期，依次加入大蒜素终浓度为0、40、80ug/ml的RPMI1640培养，孵育72h后收集细胞并提取总蛋白，BCA法检测蛋白浓度，取30Ug蛋白分别加入ceispase-3、caspase-8检测液，每

7、组设，4个复孔，37°C孵育1.5h，酶标仪检测405rnn波长各孔0D值，依据标准曲线计算caspase-3、caspase-8活性单位。1.7统计学分析采用SPSS16.0统计学软件进行数据分析，计量资料以x±s表示，组间比较采用t检验，以P〈0.05为差异有统计学意义。2结果2.1大蒜素及紫杉醇对A549/Taxol细胞增殖能力的影响实验结果显示大蒜素对A549/Taxol细胞增殖冇显著的抑制作用，随人蒜素浓度增加，A549/Taxol细胞增殖显著下降，72h大