水热法制备cdse量子点及其在细胞成像上的应用

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1、水热法制备CdSe量子点及其在细胞成像上的应用摘要：指出了CdSe量子?c作为一种新兴的荧光标记纳米材料，被广泛应用于生物医学等领域。提出了一种以亚硒酸钠为硒源，N-乙酰-L-半胱氨酸为稳定剂，采用水热法一步合成高质量水溶性CdSe量子点的新方法。实验考察了反应物的投料比及其加入顺序对CdSe量子点荧光性能的影响，并从中优化CdSe量子点的合成条件，用荧光光谱对CdSe量子点的发光性能进行了表征。选取最佳条件下制备的CdSe量子点标记人肝癌细胞，N-乙酰-L-半胱氨酸修饰的CdSe量子点具有良好的水溶性和

2、生物相容性，能很好地对人肝癌细胞进行荧光成像。关键词：CdSe量子点；水热法；荧光；细胞成像屮图分类号：R318文献标识码：A文章编号:16749944(2017)100223041引言量子点(quantumdots),是一种由II-VI族或III-V族元素组成的，其中n-vi族、ni-v族和iv-vi族这三个系列的量子点较为常见，n-vi族量子点由于其制备过程简单，荧光性能优良、光学性质稳定等优势而被广泛用于各领域的科学研宄中。经过多年的研究和改进，量子点的合成方法正在不断地完善。用于生物荧光标记的量子

3、点通常采用胶体化学法来制备，按所用原料不同可分为金属有机溶剂热分解法和水相合成法两种路线。水相合成法相比于金属有机溶剂热分解法具有试剂无毒、价格低廉、实验操作简单、环境友好等优势，且水相法制备量子点无需结构修饰就具有很好的水溶性和生物相容性，这些特性使量子点能很好应用于生物成像的科学研究中。水热法是在特制的密闭反应器（如高压反应釜等）中，通过恒温加热使反应体系在高温高压的环境下反应生成量子点的方法。水热法不但继承和发展了水相法的优点，而且克服了回流法温度不能超过100°C的缺陷，反应温度的提高极人地缩短了

4、量子点的制备时间。水热法还改善了量子点表面缺陷，使量子点的荧光量子产率得到了显著的提高。量子点在经过适当的结构修饰后，能与细胞表面的分子或肽特异性结合，进而成功地标记靴细胞。1998年Bruchez等人首次成功使用量子点来标记固定细胞，此后经过后人的不断研宄，量子点的细胞成像技术不断提高。将量子点引入到活细胞的方式有电穿孔技术、显微注射法，也可以经过细胞自身的内吞作川进入到靶细胞屮。量子点相比于传统有机荧光染料具冇许多优势，它在生物医学研宄中能够解决传统冇机荧光染料解决不了的问题，例如量子点的荧光寿命长，

5、漂白性强，这使得用量子点标记的细胞可以在较长的一段时间内进行反复成像，实时监测细胞的动向。量子点具有生物相容性好、低毒等优点使其被广泛应用于细胞成像的研究中。总之，量子点作为新型的荧光探针为生命医学的细胞研究工作提供了强而有力的工具。2实验部分2.1实验试剂与仪器2.1.1实验试剂柠檬酸钠（Na3C6H507?2H20,上海展云化工有限公司，分析纯AR）;氯化镉（CdC12?2.5H20,国药集团化学试剂有限公司，分析纯AR）;硼氢化钠（NaBH4,国药集团化学试剂有限公司，纯度96%）；亚硒酸钠（Na2

6、SeO3,XiyaReagent,纯度98%）;N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC,C5H9N03S,上海阿拉丁试剂有限公司，纯度99%）；罗丹明-6G（C28H31N203C1,上海阿拉丁试剂有限公司）；人肝癌细胞（HcpG2）（购自上海北诺生物科技有限公司）;DMEM高糖液体培养基（海克隆HyClone）;胎牛血清（FBS,浙江天杭生物科技有限公司）;青霉素钠（C18H17N204SNa,biosharp）；硫酸链霉素（C42H84N14036S3,biosharp）；氯化钠（NaCl,国药集团化学试剂有

7、限公司，分析纯AR）；氯化钾（KC1,国药集团化学试剂有限公司，分析纯AR）；磷酸氢二钠（Na2HP04?12H20,国药集团化学试剂有限公司，分析纯AR）；磷酸二氢钾（KH2P04,国药集团化学试剂有限公司，分析纯AR）;实验屮所用的水均为超纯水。2.1.2实验仪器CP214型电子天平（奥豪斯仪器上海有限公司）；85-2型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器有限公司）；DHG-9030型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；LS55型荧光分光光度计（PerkinElmer珀金埃尔默企业管理（上海）有限公司

8、）；Lambda35型紫外分光光度计（PerkinElmer珀金埃尔默企业管理（上海）有限公司）；高纯N2（四川天一科技股份有限公司）；ZF-20C暗箱式自动紫外分析仪（上海宝山顾村电光仪器厂）;MF53型倒置荧光显微镜（日本奥林巴斯公司）。2.2实验方法与步骤2.2.1CdSe量子点的合成(1)溶液的配制。Na2SeO3溶液的配制:称取Na2SeO3固体0.0413g,加5mL超纯水，所配溶液浓度为0.04mol/L；拧檬酸