小肠结肠炎耶尔森菌调查

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1、小肠结肠炎耶尔森菌调查［摘要］目的了解高密市食品中小肠结肠炎耶尔森菌及动物带菌情况。方法2006-2010年采集家畜家禽粪便、冷冻食品共2097份，4°C冷增菌后用选择性培养基进行病原菌分离培养并作生化鉴定，将可疑菌株做进一步的血清学鉴定和生物分型及毒力检测。结果2097份标本屮分离出131株小肠结肠炎耶尔森菌，总的检出率为6.25%，其屮0:3（携带毒力基因ail+、ystA+、rbfc+）和0:9血淸型的检出率分别为0.76%和1.52%。108株仅携带ystB基因（82.44%）;26株不携带任何基因（

2、19.85%）。131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在3个生物型，其中生物1A型占74.80%;生物3型占1.52%;生物4型占0.76%。结论本地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌，有感染人和动物及引起食源性型疾病的可能，因此必须加大该菌的监测力度，以预防小肠结肠炎耶尔森菌病的感染流行。［关键词1小肠结肠炎耶尔森菌；血淸分型；生物分型；毒力基因.小肠结肠炎耶尔森菌广泛分布于自然界，是能在冷藏温度下生长的少数几种肠道致病菌之一［丨］，除引起胃肠道症状外，还可引起关节炎，结节性红斑及肠系膜淋巴炎等疾患，甚至引起败血症，造

3、成死亡［2］。本病以散发为主，但也呈暴发性流行，并有明S的地域性分布。该菌还是重要的食源性致病菌，国A外均时有报道过油该菌引起的食物屮毒，其原因都是食品污染小肠结肠炎耶尔森菌引起的［3,4］，2006-2010年间采集家畜家禽新鲜粪便及各种冷冻食品2097份进行该病原菌的分离鉴定、血清分型、生物分型毒力因子检测，0的是为了了解高密市食品中小肠结肠炎耶尔森菌和动物带菌情况，现将结果报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1标本来源参照《全国小肠结肠炎耶尔森菌监测方案》，采集宿主动物新鲜粪便、各种冷冻食品共计20

4、97份。1.1.2主要试剂小肠结肠炎耶尔森菌选择性培养基力美国Acumediamanufactures,inc.lansing,Michigan48912产品；改良磷酸盐缓冲液（PSB）及其他培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司；所用抗生素及api20E生化条均为在有效期闪。1.2实验方法1.2.1分离培养取动物粪便标本、冷冻食品5g加入45ml的改良磷酸盐缓冲液（PSB），4°C冰箱冷增菌后，分别于第7天、第14天、第21天接种CIN和麦康凯琼脂平板，经26°C48h培养后观察挑选可疑菌落（在CIN平板上挑

5、取扁平，有明显的边缘，中心为深红色，周围有透明圆环，成“公牛眼”状菌落，在麦康凯平板上挑取无色半透明不粘稠针尖状大小的菌落）做进一步的鉴定。1.2.2生化鉴定及分型将上述可疑菌落转种改良克氏双糖铁琼脂斜时进行初筛，26°C培养24h,根据改良克氏双糖铁及生化性状：斜面和底层均变黄（少数不发酵或迟缓发酵蔗糖斜面可仍为红色）、不产气、硫化氢阴性、尿素酶阳性、26°C培养24h动力阳性、37"C培养24h动力阴性，镜检为革兰染色阴性无芽孢球杆状或球状细菌，用法国梅里埃公司生产的api2（）E生化条做进一步的系统生化

6、鉴定。1.2.3血清分型对可疑菌株用玻片凝集法进行血清分型，同吋设生理盐水作为对照。1.2.4生物分型将分离到的菌株参照有关文献资料进•一步做生物分型1A，1B，2，34和5型。1.2.5毒力相关基因检测利用聚合酶链反应（PCR）方法测定ail、ystA、ystB、virF、yadA和rbfc相关毒力基因。2结果2.1标本检出情况2097份样本巾共分离到131株小肠结肠炎耶尔森菌，总的检出率为6.25%(131/2097),其屮鸭粪检出率最岛为14.7%(5/34)，冷冻食品检出率最低为0.49%(4/811

7、)(表1)。2.2血清分型131株小肠结肠炎耶V森菌分布在7个血清型，其巾65株为不确定血清型，定型的血清型巾，0:5血清型36株(27.48%)；0:8血清型17株(12.98%)；0:9血清型6株(4.58%)；o:7,8血清型4株(3.05%);o:3,0:48,0:19,8血清型均为1株(0.76%)(表2)。2.3生物分型131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在3个生物型，其中1A型98株(74.80%);生物3型2株(1.52%);生物4型1株(0.76%)；其他30株(22.90%)。2.4毒力分布对分

8、离到的131株小肠结肠炎耶乂麻菌分别进行ail、ystA、ystB、virF、yadA和rbfc相关毒力基因检测，其中1株o:3血清型携带毒力因子ail+、ystA+、rbfc+(0.76%)；108株仅携带ystB+基因(82.44%)；26株不携带任何基因(19.85%)(表3)。3讨论小肠结肠炎耶尔森蘭有广泛的分布在自然界屮，是一种人畜共患病的病原体，其主要存储宿主为家畜，家禽，鸟类等，在外环