实验二荧光分光光度法测定富里酸

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1、实验二荧光分光光度法测定富里酸一实验0的与要求1、了解荧光分光光度计的基本组成结构，并学会操作使用：2、掌握荧光分光光度法定量分析的基本原理。二实验原理富里酸（FA）在水中是一种荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与FA浓度呈正比：If=kc基此，测定一系列己如浓度的富里酸的荧光强度，然后以荧光强度对富里酸浓度作标准曲线，再测定未知浓度富里酸的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。图1富里酸的分子结构三仪器、药品及材料F-7000型分子荧光分光光度计，吸收池，容量瓶，移液枪；富里酸，去离子水四实验步骤1.系列标准溶液的配制准确称取0.2500g富里酸，加入少量水

2、溶解，移至250mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。此富里酸溶液浓度为1.OOOg•L取6只100mL的容量瓶分别加入1.000g-I；1的富里酸标准液0,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00mL,,用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。2.绘制激发光谱和发射光谱在200-500nm范围内扫描荧光激发光谱。在300-600nm范围内扫描荧光发射光谱。1.绘制标准曲线荧光激发波长固定在340nm处，荧光发射波长固定在420nm处，从发射光谱上测定系列标准溶液的荧光发射强度。2.未知试样的测定在标淮系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。3.绘制荧光强度

3、If对富里酸溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。五数据处理1.原始数据标准溶液未知液样品编号123456X浓度/(mg.L-1)0246810荧光强度-0.0290.2300.4620.6750.9161.1220.7742.标准曲线绘制和未知样品含量计算。荧光强度If线性（荧光强度If）荧光强度Ify=0.1147X-0.0106R2=0.999得到富里酸荧光强度与浓度的关系曲线为y=0.1147x-0.0106，测得未知液荧光强度为0.774，即0.774=0.1147X-0.0106得：x=6.84所以未知样品浓度为6.84mg-L'1六实

4、验注意事项1、试液的浓度不要太高。2、仪器的操作要规范。实验结束后，检查仪器是否正常，关闭是否正常。七思考题1、在荧光测量时，为什么激发光的入射与荧光的接收不在一直线上，而是呈一定的角度？答：由于激发光源照射作用下，试样基态原子受激发产生荧光，若成一直线，则荧光的接收会受到由激发光源产生荧光的干扰，影响测定值。2、哪些因素可能会会对富里酸荧光产生影响？答：(1)溶剂：同一荧光物质在不同的溶剂中可能表现出不同的荧光性质。溶剂的极性增强，对激发态会产生更大的稳定作用，结果使物质的荧光波长红移，荧光强度增大。(2)温度：升高温度会使非辐射跃迁概率增人，荧光效率降低。(3

5、)PH：大多数含有酸性或碱性取代基团的芳香族化合物的荧光性质受PH影响很大。(4)富里酸浓度、试样中的杂质、吸收池上的杂质等会对富里酸荧光产生影响。3、为什么要先测激发光谱？答：先测激发光谱找到合适的激发波长，再根据这一波长确定发射光谱的区间。附：F-7000的操作1、先打开电脑，再打幵仪器，按下仪器主机面板下方的褐色按钮(POWER)。同时，观察主机正面面板右侧的XeLAMP和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色。预热半小时。2、双击桌而“FLSolutions”图标，进入主窗口。(1)点击界面右侧Method一General一Measurement—wavele

6、ngthscan测量模式；(2)在“Instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数。3、打开盖子，安装待测样品；先按“Prescan"，当显示“Ready”后，再按下uMeasure"，窗口出现扫描谱图。(每次取出样品之前需按下“Close”显示“Open”后再打开盖子。)4、实验结束后，先关闭电脑，后关闭仪器。