分子发光分析法1

《分子发光分析法1》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第三章分子发光分析法第一节荧光分析法第二节磷光分析法第三节化学发光分析法第一节荧光分析法（Fluorescence）一概述(一)、分子发射光谱与分子能级结构吸光无辐射跃迁系间跨越单重线态三重线态荧光磷光E0E1E2振动弛豫内部转换(二)、分子吸收光谱与分子荧光光谱吸光荧光250300350400450蒽乙醇溶液吸收和荧光光谱相对强度300400500相对强度荧光光谱与吸收光谱镜像对称荧光光谱较吸收光谱简单硫酸奎宁在稀硫酸中的荧光光谱与吸收光谱(三)、荧光量子产率（荧光效率）发荧光的两个必要条件分子能吸收光子而跃迁至激发态激发态分子能以光的形式释放能量荧

2、光效率（f）=发出光子数吸收光子数如果一个分子将吸收的光子全部释放，则其量子产率为100%。化合物荧光效率溶剂荧光素0.92（0.1MNaOH）曙红0.19（0.1MNaOH）罗丹明B0.97（乙醇）蒽0.31（己烷）核黄素0.26（水，pH7）菲0.10（乙醇）萘0.12（乙醇）酚0.22（水）叶绿素0.32（苯）某些化合物的荧光效率(四)、量子产率与分子结构荧光通常发生在具有刚性结构和平面结构的-电子共轭体系分子中，任何有利于提高-电子共轭度的结构改变，都将提高荧光量子产率，或使荧光波长向长波长方向移动。化合物荧光效率平均波长苯0.07283

3、联苯0.18316对联三苯0.93342化合物荧光效率平均波长苯0.07283萘0.23334蒽0.36402苯0.07283甲苯0.17285乙苯0.18286(五)、荧光分析的特点1、灵敏度高2、选择性好3、仪器简单4、应用范围广二荧光定量分析基础If=fIa=f(Io-I)If:荧光强度Io:所吸收的辐射强度；f：荧光效率(一)、荧光强度与浓度将指数展开：如果吸光度A<0.05,方括号中其他各项与第一项相比均可忽略：fI0b由于A=bc：故在实验条件固定时，荧光强度与浓度成正比,即：(二)、荧光熄灭IfC01、内滤效应发射的荧光在溶液

4、中通过时被基态分子所吸收而使荧光强度下降的现象。2、淬灭效应碰撞淬灭：荧光分子之间或荧光分子与熄灭剂分子之间碰撞引起的荧光熄灭效应M+hM*(吸光）M*M+h’（发生荧光）M*+Q熄灭例如：芳香烃的荧光可以被溶解O2所淬灭转入三线态的淬灭含溴化物、碘化物、硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物及某些杂环化合物容易转变为三重态，因而易使荧光淬灭三荧光分析的仪器光源单色器液槽检测器记录器单色器I0If1、光源汞弧灯山弧灯激光光源气荧光光源强度>紫外-可见吸收光谱光源激光诱导荧光LaserInducedfluorescence低压汞灯：254nm2、单

5、色器滤光片棱镜光栅400500600nmRelativeFLIntensityEXEMWavelength/Stocks位移标准1样品2Wavelength/If荧光光谱If11A1If22A2=量子产率的测定1A1If12A2If2=奎宁在0.1M的硫酸中荧光量子产率的绝对值为0.55。荧光分析的缺点——散射光影响磷光分析的仪器光源检测器贝克勒耳圆盘低温磷光分析固体基质室温磷光分析保护流体室温磷光分析无保护流体室温磷光分析磷光分析的缺点——仪器复杂，需要固体基质或保护化学发光分析的仪器记录器四荧光、磷光和化学发光分析法（Fluoresce

6、nce，phosphorescenceandchemiluminescenceanalysis）(一)、理论基础1、分子发射光谱与分子能级结构吸光无辐射跃迁系间跨越单重线态三重线态荧光磷光E0E1E2振动弛豫（1）分子吸收光谱与分子荧光光谱吸光荧光250300350400450蒽乙醇溶液吸收和荧光光谱相对强度300400500相对强度荧光光谱与吸收光谱镜像对称荧光光谱较吸收光谱简单硫酸奎宁在稀硫酸中的荧光光谱与吸收光谱（2）荧光量子产率（荧光效率）发荧光的两个必要条件分子能吸收光子而跃迁至激发态激发态分子能以光的形式释放能量荧光效率（f）=发出光子数

7、吸收光子数如果一个分子将吸收的光子全部释放，则其量子产率为100%。化合物荧光效率溶剂荧光素0.92（0.1MNaOH）曙红0.19（0.1MNaOH）罗丹明B0.97（乙醇）蒽0.31（己烷）核黄素0.26（水，pH7）菲0.10（乙醇）萘0.12（乙醇）酚0.22（水）叶绿素0.32（苯）某些化合物的荧光效率（3）量子产率与分子结构荧光通常发生在具有刚性结构和平面结构的-电子共轭体系分子中，任何有利于提高-电子共轭度的结构改变，都将提高荧光量子产率，或使荧光波长向长波长方向移动。化合物荧光效率平均波长苯0.07283联苯0.18316对联三苯0

8、.93342化合物荧光效率平均波长苯0.07283萘0.23334蒽0.36402苯0.072