初始污染菌回收率验证方案

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1、□替代：—日a初始污染菌回收验证方案版次：口新订制定人^审批会签批准人:生效日期:1.验证目的初始污染菌是产品屏障系统表面或内的活微生物数量。初始污染菌冋收率用于补偿无法从产品和/或培养基中完全取出的微生物的数值。也是对某一特定的技术从产品上移除和/或培养微生物的能力的测定值。2.适用范围适用于我公司自粘绷带的初始污染菌和敷料的检测3•检验依据IS011737-1:2006医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定4.实验设备与材料4.1设备百级超净工作台、无菌检查膜过滤器、电热干燥箱、电热恒温培

2、养箱、生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、PH试纸、冰箱。4.2培养基及稀释液胰酪大豆陈琼脂培养基、0.9%氯化钠洗脱液4.3生化培养箱温度胰酪大豆腺琼脂培养基设置温度30°C-35°C培养3天；4.4其他实验材料微孔滤膜（孔径W0.45um,直径约50mm）.量筒、量杯、剪刀、锻子、吸管、立式打火机、锥形瓶、试管、培养皿。4.5培养基和洗脱液准备培养基的制备：根据文件制备胰酪大豆腺琼脂培养基1000ml;《培养基的制备》一一3IINQ-MT55；洗脱液的制备：根据文件制备0.9%氯化钠洗脱液13L；《洗脱液的

3、配制》一一3HNQ-MT56；4.6蒸汽灭菌将配制好的培养基、洗脱液以及试验时需要使用的器材：培养皿、量筒、量杯、银子、剪刀等放入已经注入7L纯水的高压蒸汽灭菌锅中，盖上锅盖，拧紧阀门，将左后侧排气阀打开至两个处，温度设置121°C,时间20min进行高压灭菌。4.7恒温干燥将灭菌完毕的培养皿、量筒、量杯、锡子、剪刀等放入电热干燥箱150°C干燥两小时；5.实验程序4.1抽样。从正常生产批次中抽取已包装完成的未灭菌产品，尺寸15mm*5yds,抽取3件。4.2加注培养基将培养基注入到培养皿中，每个培养皿加注25m

4、l培养基，共加注36个培养皿，盖上盖子，待其冷却;5.3空白对照取6个已经加注培养基的培养皿均匀放置在微生物操作台的各个位置，打开盖子，标记作为空白对照;4.4洗脱在微生物操作台里以无菌操作方式将实验样品充分打开分别浸入装有已知容量的300ml0.9%氯化钠洗脱液的无菌均质袋中，运用无菌均质器设置10档拍打3分钟，洗脱产品上的微生物，用于洗脱产品外表面初始污染菌。4.5接种4.5.1釆用薄膜过滤法，用灭菌后的银子夹取微孔滤膜放置在三联过滤器上，放上滤杯，将供试液平均倒入两个滤杯中进行抽滤，抽滤结束用100ml（每

5、张滤膜每次冲洗量）0.9%氯化钠洗脱液，每张滤膜冲洗一次，将滤膜（菌面朝上）放置于已经注入培养基的培养皿中并做好标识（第一次洗脱）。4.5.2将冲洗过的供试品以上述方法再洗脱三次，总共洗脱四次。每次洗脱后将做好接种的培养皿进行标识。5.5.3将洗脱结束的供试品加入灭菌好融化的50ml-100ml中胰酪大豆腺琼脂培养基作为琼脂覆盖。5.5.4其它供试品按照以上洗脱、接种方式逐一操作并做好标识。5.5.3阴性对照实验：仅使用同一批次灭菌0.9%氯化钠洗脱液过滤，将滤膜（菌面朝上）分别置于胰酪大豆腺琼脂培养基上培养作为

6、阴性对照。5.5结果分析冋收率二第一次冲洗得到的微生物数量/冲洗N次得到的微生物总数量*100%,冋收率应大于70%。第一件第二件第三件第一次冲洗A1B1C1第二次冲洗A2B2C2第三次冲洗A3B3C3第四次冲洗A4B4C4琼脂覆盖A5B5C5空白对照000总共菌落数A总B总C总第一次冲洗的回收率A1/A总B1/B总C1/C总校正因子100/首次处理平均回收率根据上述数据，计算出第次冲洗的回收率的平均数，以后每一季度监测一次，初始污染菌的菌落报告z以得到菌落数/回收率的数值报告。4.相关记录产品名称自粘绷带生产批

7、号LF170224-SH型号规格15inm*4.5m抽样数量3卷检验依据TSOI1737-1:2006检验方法薄膜过滤法培养基名称胰酪大豆腺琼脂培养基供应商广东环凯结论第一件第—件第三件第一次冲洗368392412第二次冲洗10696128第二次冲冼645242第四次冲洗283624琼脂覆盖131617空白对照000菌落总数579592623第一次冲洗得回收率63.56%66.21%66.13%平均回收率65.3%校正因子1.53