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时间:2018-12-06
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1、不同刺激因素对小鼠胶原影响【摘要】目的:探讨辐射刺激、心理应激加酒精刺激及抗原免疫刺激3种不同因素对胶原蛋白的代谢失调及组织器官的损坏。方法:辐射刺激采用Y射线照射,心理应激加酒精刺激采用小站台水环境应激加质量浓度42%白酒灌胃刺激,抗原免疫刺激采用II型胶原免疫。胶原蛋白采用苦味酸-天狼星红染色,偏振光显微镜下观察;Image-ProPlus图像分析系统胶原变化状况。结果:辐射损伤后胶原在血管周围的面积明显较非刺激组增多,辐射后4周较2周更严重;心理应激加质量浓度42%白酒灌胃后,心、肝、肾的血管周围均出现胶原沉聚面积加大
2、,且向周围组织渗透;II型胶原免疫后关节腔胶原的沉聚面积较非刺激组更为严重,导致关节强直。结论:物理、化学、心理及生物因素都会不同程度影响胶原蛋白的代谢与失衡,这些胶原蛋白沉聚在血管周围导致硬化,反应的面积大小次序为心〉肾〉肺〉肝。沉聚在关节周围导致关节强直或活动受限。【关键词】胶原蛋白;辐射损伤;心理应激;酒精肝损伤;小鼠;实验研究胶原蛋白是生物体内一种重要的蛋白质,也是结缔组织的主要蛋白成分,由于其优良的理化性质和生理活性功能,已引起人们的广泛关注。水解动物蛋白又称酶解胶原蛋白,是一种生物性高分子物质,其含有的18种氨基
3、酸中有7种是人体必需的,还含有人体所必需的部分金属微量元素,蛋白营养价值高、性能优越,是良好的天然生理活性物质,易被人体吸收利用,故能促进细胞生长,改善人体多种功能,免疫调节作用明显。骨胶原多肽具有抗高血压、抗氧化和衰老、预防和治疗骨关节炎和骨质疏松、治疗胃溃疡等疾病和促进皮肤胶原代谢、促进矿物质吸收等生理功能[1-3]。但是事物都有其两面性,在自然界和日常生活中,可怕的物理、化学、心理和生物的致病因素会给胶原带来不同的“新生”,胶原的作用可谓喜忧参半。辐射损伤、心理应激及酒精肝损伤及免疫性关节炎实验提示,胶原参与了疾病的发
4、生发展过程,现将研究结果报道如下。1实验材料1.1实验动物7〜8周龄昆明小鼠(购于北京维通利华实验动物技术有限公司,动物合格证号0205315)70只,雌性,体质量20〜22go1.2实验试剂天青石蓝、饱和苦味酸天狼星红(Sigma公司生产)、质量浓度42%白酒。1.3实验仪器60Cov照射机(北京双原仪器有限公司生产);有机塑料盒;电刺激条件反射箱及水站台实验设备(自制);均质仪(Ika)、日本生产的OLYMPUSIX-70倒置焚光显微镜及Image-ProPlus图像分析系统。2方法2.1动物分组①按物理因素刺激分为未照
5、射组、照射组;②按心理及酒精因素刺激分为未应激组、心理应激组、心理应激+酒精刺激组。③按生物因素刺激分为未刺激组、胶原免疫刺激组。按以上3种因素将实验用小鼠共分为7组,每组10只。正常饲养。2.2物理因素刺激(放射照射刺激)照射动物采用60Cov射线进行全肺单次照射24Gy。2周和4周取肺病理切片。2.3心理及酒精因素刺激(应激+酒精刺激)电刺激条件反射箱,实验时通电,放入小鼠,电击其足底部;每曰定时电击1次,每次20min。电击后,水环境站台18h,即7:00-23:00,中间每隔3h给予食物灌胃1次,每天22:00给予酒
6、精诱导,持续10d。取心、肝、肾病理切片。2.4生物因素刺激(II型胶原免疫刺激)取0.05mL乙酸加入II型胶原冻干粉中,使其混合均匀,将完全佐剂置入试管中,开启均质仪慢慢加入等量II型胶原,乳化至油包水状。在每只小鼠尾根注射II型胶原和完全佐剂乳化后的混合液0.1mL,1周后以相同剂量予每只大鼠尾部加强注射1次,取关节病理切片。2.5苦味酸-天狼星红染色组织病理切片用质量浓度0.1%饱和苦味酸天狼星红溶液染色60min,自来水洗5min。May-苏木素染液复染细胞核1min,自来水洗10min,梯度酒精脱水各1min,二
7、甲苯透明各15min,中性树胶封片。偏振光显微镜下观察肺泡间隔及肺间质面内胶原的沉聚分布。用日本产OLYMPUSIX-70倒置荧光显微镜及Image-ProPlus图像分析系统,在偏光显微镜下分别测定胶原在血管周的面积变化。2.6统计学方法采用SPSS15.0软件进行统计分析,计量资料以表示,组间差异采用方差分析及t检验,以P4.1胶原蛋白与血管器官纤维化是导致器官衰竭的常见原因之一,在发迗国家,大约有45%的患者死亡与慢性纤维增生性疾病有关。在我国,肺纤维化的发病率近年有上升趋势。肺纤维化与肺泡毛细血管基底膜受损、上皮内皮
8、细胞再生障碍及肺组织的异常修复有关,它以过度的细胞外基质沉聚和抗凋亡的肌成纤维细胞聚集为特征。细胞外基质过度沉聚是肺纤维化的重要特征,I、III型胶原蛋白是肺纤维化细胞外基质(ECM)的主要成分,它们在肺组织中的含量反映了肺纤维化的严重程度。基质金属蛋白酶(酮Ps)是一类最重要的降解ECM
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