医学毕业论文局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子κb的表达

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1、因子KB的表达姓名：2014年6月25日局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子kB的表达【摘耍】H的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)后杏仁核和海马环氧酶2(COX2)、5脂氧酶(5LO)和核因子kB(NFkB)的表达情况，探讨其损伤机制。方法线栓法制备人鼠人脑中动脉栓塞2h/再灌注24h模型。免疫组织化学法检测杏仁核和海马COX2、5L0和NFkB蛋白表达，计数COX2、5L0和NFkB阳性细胞数，MoticImagesAdvanced3.0图像分析系统作半定量分析。结果CIRI后大鼠杏仁核和海马COX2、5LO和NFkB阳性细胞计数明显增高(P0

2、.001)，平均灰度值显著卜*降，表达增强(P0.001)。结论CIRIU大鼠杏仁核和海马区域的COX2、5LO和NFkB表达堉强，继而引发后续反应，介导神经损伤。【关键同】脑缺血再灌注损伤杏仁核海马环氧水解酶类杏仁核和海马是边缘系统的重要核团，它们之间不仅解剖位置紧临，其关系也很密切。□前对海马在脑缺血再灌注损伤(cerebralischemiareperfusioninjury,CIRI)中神经细胞的凋亡情况已有报道［1］。本课题组既往的研究表明，局灶性CIRI后大鼠杏仁核出现缺血坏死、水肿，正常锥体神经元密度减少［2］，其机制可能与MMP9、AQP4表达增加宥关。笔者从花

3、生冈烯酸(arachidonicacid，AA)代谢通路主要限速酶环氧酶2(cyclooxygenase2,COX2)和5脂氧酶(5lipoxygenase,5LO)在CIRI屮的活化，以及核阿子KB(nuclearfactorkappaB，NFkB)介导神经细胞损伤的角度，研究局灶性CIRI后大鼠杏仁核和海马COX2、5LO和NFkB的表达情况，以期进一步探讨杏仁核和海马在CIRI中的损伤机制。1材料与方法1.1材料1.1.1动物SpragueDawley大鼠，雄性，体质量（250±25）g，福建医科大学实验动物中心提供（合格证号:闽实动质准第00205号）。术前12h禁食，

4、自由饮水。1.1.2试剂和仪器光学显微镜及摄像系统（口木Olympus公il）;MoticImagesAdvanced3.0图像分析系统（呑港麦克臾迪公司）;5LO、COX2、NFkB兔抗大鼠申克隆抗体（美国Cayman公司）;SABC兔IgG免疫组织化学试剂盒、DAB敁色试剂盒（武汉Boster公司）;枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液（北京中山生物技术有限公句）;其余试剂均为W产分析纯。1.2方法1.2.1模型制备SD大鼠随机分假手术组和模型组。模型组参照文献［3］线栓法制备右侧大脑屮动脉栓塞/再灌注（middlecerebralarteryocclusion/reperfbsi

5、on，MCAO/R）模型，假手术组不插入栓线，其他手术操作相同。1.2.2标木制作缺血2IV再灌注24h吋，迅速断头取脑，去除小脑及嗅球，取视交叉至漏斗柄的脑片置于4%中醛溶液中固定1周，常规脱水、透明、浸蜡、包埋，冠状切片5贴于多聚赖氨酸处理的载玻片上，免疫组织化学染色，观察各指标。1.2.3COX2、5LO和NFkB蛋白在杏仁核和海马的表达免疫组织化学SABC法分别检测损伤侧杏仁核和海马COX2、5LO和NFkB的蛋白表达，均按试剂盒说明书逐项操作，室温敁色。于10x40视野下随机选取和应区域5个不重叠视野进行阳性细胞计数，COX2、5LO阳性细胞的细胞质呈棕黄色，核淡染;

6、NFkB阳性细胞的细胞质呈.惊黄色，核深染。K、/:用MoticImagesAdvanced3.0图像分析系统行半定量分析，计算阳性细胞的平均灰度值。1.3统计学处理采用SPSS13.0软件进行统计分析，实验数据以x：hs表示，各参数间的比较采用t检验。2结果A:假手术组；B:杏仁核；C:海马.COX2:环氧酶2;5L0：5脂氧酶；NFkB：核因子kB.图1损伤侧杏仁核和海马环氧酶2、5脂試酶和核因子kB蛋白的表达(x400)FigIThechangesofCOX2,5LOandNFkBproteinsinamygdaleandhippocampusoftheinjuredbr

7、aintissue(x400)2.1C0X2的表达假手术组脑组织基木没有COX2阳性细胞的表达，杏仁核和海马未见阳性细胞表达;模型组杏仁核和海马见大量COX2阳性细胞(图1)，卉仁核区阳性细胞为(28.8士3.2)，海马区为(30.4土2.9)，_目？

8、z均灰度值均明显下降，提示模型组杏仁核和海马COX2的表达增强(P0.001，图2,3)。2.25L0的表达假手术组脑组织仅有少量5LO阳性细胞表达，杏仁核和海马未见阳性细胞表达;模型组杏仁核区阳性细胞为(30.7±3.0)，海马区为(32.