莫索尼定及贝那普利抗肾组织纤维化的对比研究

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1、莫索尼定及贝那普利抗肾组织纤维化的对比研究孔晶(黑龙江省哈尔滨市中医医院150076)【中图分类号】R971+.4【文献标识码】A【文章编号】1672-50S5(2010)23-0101-02【摘要】目的应用莫索尼定及贝那普利干预阿霉素肾病大鼠，比较二者对肾组织调节肾小管的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白组织抑制因子-l(TIMP-l)的影响。方法大鼠右肾摘除加尾静脉注射阿霉素，随机分为模型组、莫索尼定组、贝那普利组、对照组。12周测血、尿生化指标及血压；光镜及电镜观察肾组织形态学改变；免疫组化检测肾组织MMP-9.TIMP-1蛋白表达；原位杂交测MMP-9mRN

2、A、TIMP-lmRNA表达。结果与对照组比较，模型组大鼠蛋白尿、血浆NE、AngII水平、血压、肾损害指标均上升；肾组织内MMP-9、TIMP-1蛋白及mRNA表达均明显上调；两治疗组与模型组比较，MMP-9蛋白及mRNA进一步上调，生化指标及TIMP-1都被显著抑制。W那普利较莫索尼定更明显降低蛋白尿及血浆Angll水平。结论莫索尼定及贝那普利均通过调节肾组织纤维化爲有肾保护作用，部分机制可能是通过抑制交感神经活性，调节细胞外基质降解而起作用。【关键词】莫索尼定贝那普利基质金属蛋白酶-9基质金属蛋白酶组织抑制因子-1肾间质纤维化(RIF)是肾功能损害的主要病理特征，与细胞外

3、基质(ECM)的沉积和抑制降解有关，基质金属蛋白酶系(MMPs)与基质金属蛋白组织抑制因子共同调节ECM合成与降解，二者作用失衡，导致ECM堆积。近年来，交感神经在肾脏疾病进展中的潜在作用受到肾科医师重视，肾脏疾病患者交感祌经活性宂进，抑制交感神经可缓解肾小球硬化，但对于交感神经与肾间质纤维化的研宄在国内外均未见报道。木研究探讨交感神经抑制对RIF的影响及其可能的机制。1材料与方法1.1实验方法1.1.1动物模型和分组健康雄性Wistar人鼠，体重180-220g,测体重、尿蛋白阴性后摘除右肾，按3.5mgokg-l体重尾静脉注射0.2%盐酸阿霉素，一周后重复。随机分为模型组(

4、Mod)、莫索尼定组(Mox)、贝那普利组(Ben｝、假手术对照组(Con)。术后第二天Mox组给予莫索尼定1.5mg-lkg-ld-l,Ben组给予洛丁新10mg-lkg-ld-l灌胃。12周测体重、血压、蛋白尿，采血，酶法测定血清肌酐，改良荧光法测定血浆NE，放免法测定Angll,左肾原位灌注后处死大鼠，取肾组织。1.1.2肾组织病理检查肾组织经HE、Masson漿色。MoticImages自动图象分析系统下测肾小球截面积(AG),公式VC=1.38/l.l×AG3/2计算体积；肾小管损害程度采用百分比平分法评估：计算20个视野中发生损害的小管数占肾小管总数的百

5、分比。肾间质纤维化程度应用肾间质相对面积(Masson染色绿染区＞进行半定量评估;电镜标本由JEM-1220型电镜观察。1.1.3免疫组化及原位杂交MMP-9、TIMP-1蛋白表达检测采用sABC法：3μm厚石蜡切片，常规脱蜡至水，火活内原性酶，热修复抗原，抗原抗体反砬，滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟，滴加一抗，＜C孵育过夜，滴加二抗37°C20分钟。PBS洗涤，阴性对照用0.1MPBS代替一抗。DAB显色、脱水、透明、封片、显微镜观察。MMP-9、TIMP-lmRNA的表达用原位杂交法测定(试剂盒购自武汉博士德)，严格按说明书操作，不加探针为阴性对照。阳性产物呈棕

6、黄色，结果行半定量分析：镜下计算阳性面积百分比，每例标本测15个高倍镜视野，取均值。1.2统计学处理计量资料以均数±标准差(X±S)表示，组间差异比较采用单因素方差分析，指标之间的相关性采用多原线性冋归分析，由SPSS10.0统计软件完成。2结果2.1一般情况及生化指标变化与对照组比较，模型组实验两周时食欲下降、体重减轻及水肿。12周蛋白尿、血压、NE、Angll均显著增高。两个药物组上述指标（除外血压）显著下降。两药物治疗组比较Ben降低蛋白尿及血浆Angll明显，二者对NE下调无差别。2.2病理形态学改变光镜下表现：模型组12周可见少数肾小球毛细

7、血管管腔塌陷，系膜细胞增多，肾小球体积增人，肾小管壁增厚或萎缩，腔内见蛋內管型，间质炎细胞浸润；Masson染色肾小管间质绿染区面积增大，治疗组病变轻于模型组，两治疗组之间无明显差别。电镜下12周模型组可见肾小球呈固缩状，滤孔膜溶解，基低膜厚度不均匀，系膜细胞明显增多；近端肾小管上皮细胞腔面微绒毛完全溶解，形成液化泡；部分肾小管上皮细胞可见线粒体变性。两治疗组病变减轻。2.3肾组织MMP-9、TIMP-1表达的变化模型组MMP-9、TIMP-1主要表达于肾小管上皮细胞胞浆，肾小球系膜区，间质