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1、红麵射趣馳佥腳响姓名，2014年6月25日红光照射对创伤愈合的影响【摘要】目的：建立双抗体夹心ABCELISA法，研究红光照射对创伤愈合的作用机制.方法：40名受使者随机分为4组，每组10人，A组:20mW/cm2;B组：30mW/cm2；C组：40mW/cm2；D组：对照组.红光照射45min/次，1次/d，连续10d，采用双抗体夹心ABCELISA法测定受试者VEGF,PDGF,TGFpi,bFGF含量变化情况.结果：双抗体夹心ABCELISA法检测VEGF,PDGF,TGFpi,bFGF具冇很好的特异性，红光照射组VEGF,PDGF,TGFpi,bFGF含量高于
2、对照组(P0.05)，在30mW/cm2红光照射时，bFGF含量最高.结论：红光照射加快创伤愈合与促进VEGF,PDGF,TGF(31,bFGF分泌冇关，有利于临床推广应用.【关键词】红光创伤愈合双抗体夹心法酶联免疫吸附实验0引言红光是指波600〜700nm,可以对生物体产生光化学作用的光线.红光可直接作用丁•血管、淋巴管、神经末梢和皮下组织等而发挥着相应的治疗作用.近年来宥关红光的临床研究正越來越多被人们认识和重视.Reddy等［1］极用红光照射糖尿病小鼠的实验研究中发现，632nm的红光可以使照射组小鼠的伤口愈合强度、拉力、负重力和坚韧度比对照组明显提高，总胶原浓
3、度也明显升高.Schindl等［2］应用红光照射不同原因导致的难治性溃疡患者，所有患者的溃疡在足够的照射后均能愈合，且无明显毒副作用.我们采用双抗体夹心法(ABCELISA)测定了红光照射对40名志愿者血管内皮细胞生长因子(VEGF),血小板衍生生长因子(PDGF),转化生长因子(TGFpi),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)含量的影响，进一步从分子生物学角度证实红光对软组织创伤及伤口愈合的影响，为红光照射治疗软组织创伤及伤口愈合适应症提供了理论依据.1材料和方法1.1材料200609/200708选取木院40名志愿者，无光过敏史及近期服用光过敏剂者；无慢性溶血，出
4、凝血功能界常者和无明姑出血倾向者及卟啉病者.将40名志愿者随机分为4组,每组10人.A组：20mW/cm2;B组：30mW/cm2；C组:40mW/cm2；D组：对照组.红光照射组照射1次/d，每次45min,10次，对照组用门光灯照射，照射时间、次数和实验组相M.VEGF,PDGF,TGFpi,bFGF标准品和申克隆抗体，生物素标记的VEGF，PDGF,TGFpi,bFGF单抗均由本实验室制备；辣根过氧化物酶标记Streptavidin（华美生物技术有限公nj）;预包被的96孔微孔检测板（Pierce公口］）;显色酶底物OPD（Sigma公'口J），紫外分光光度计（
5、Amersham公司），680型酶标仪（BioRad公司），HG675型红光治疗机（深圳一体智能技术有限公司），受试人血样40份.1.2方法1.2.1样本采集受试者采集全血5mL,不加抗凝剂，直接分离血清，放置-20°C冰箱备用.1.2.2VEGF,PDGF,TGFpi,bFGF含量的测定将450（iL样本稀释液加入到1.5mL进口聚丙烯管屮，再加入10
6、iL血清样本，加入20叫（1mol/L）HCL,2〜8°C放置60min,•再加入20（iL（lmol/L）NaOH，上下混匀既用或放置-2（TC冰箱备用.单克隆抗体的生物索化标记方法，参照常规方法［4-5］.双抗体
7、夹心ABCELISA法测定VEGF,PDGF,TGFpi,bFGF含量，在配置好的标准溶液中各加入25（iL待测试样品，充分混匀，37°C^fft30min,洗涤液洗涤；加入生物素化抗体50（iL,充分浞匀，37°C孵育30min，洗涤液洗涤；加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin液100pL，充分混匀，37"C孵育60min,洗漆；后再加入酶底物OPD100（iL,37°C暗处反应5〜10min,使底物显fe;最后加入2mol/L硫酸50（iL,终止反应.在BioRad680型酶标仪上测量吸光度（A492nm）值.统计学处理：计量数据以；U：s表示，应用SP
8、SS11.0统计软件进行统计学分析，统计方法采用方差分析及Dunnettt检验.2结果2.1ABCELISA法标准曲线的建立以制备的各生长因子标准浓度为横坐标，以吸光度（A492nm）值为纵坐标作图（图1）,当VEGF（系列1）浓度为32〜2000pg/mL，bFGF（系列3）浓度为16〜500pg/mL之间吋，检测生松因子的浓度与其吸光度（A492nm）值之问线性关系良好.进行冋归分析，建立ABCELISA法测定生长因子的标准曲线（阁2）并得到直线回归方程y=0.34x-0.27,当待测品在以上各浓度范围时，对数和吸光度（A492nm）值呈线性关系
