《单克隆抗体技术》ppt课件

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1、第四章抗体技术第十章抗体技术、抗体类型1、多克隆抗体(polyclonalantibody)早期人工制备抗体的主要方法，以相应抗原免疫动物，由此产生的抗体是针对多种抗原决定簇（表位）的混合抗体，故称之为多克隆抗体。★第二节抗体制备优点：来源广泛、制备容易缺点：特异性不高、易发生交叉反应多克隆抗体1890年Behring和Kitasato发现白喉抗毒素，建立免疫疗法，开创了抗体制药之先河。白喉外毒素→免疫动物→抗毒素→治白喉Behring(德,1854～1917）目前治疗性抗体产品：精制破伤风毒素、精制白

2、喉毒素、精制肉毒毒素。绿脓免疫血浆抗体制剂多克隆抗体的制备根据不同的免疫原，选择不同的免疫方案。免疫方案免疫途径免疫程序动物选择细胞融合，又称体细胞杂交是指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合形成单个细胞的过程。在适当的条件下，细胞融合在一起，产生具有原来两个细胞基因信息的单个核细胞，称为杂交细胞（hybridcell）。2、细胞融合技术和单克隆抗体显微镜下细胞融合过程Muller于1838年观察到脊椎动的肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核的肿瘤细胞。Virchow于1858年描述了正常组织、发炎组织以

3、及肿瘤组织中的多核细胞现象。Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。Lange于1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过程。Cienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在无脊椎动中发现了细胞合并现象。1958年日本学者冈田（Okada）发现仙台病毒具有触发动物细胞融合的效应。1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学融合法。1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤

4、细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。20世纪80年代出现了电融合技术。细胞融合研究进展1975年，Kohler和Milstein应用小鼠骨髓瘤细胞和绵羊细胞致敏的小鼠脾细胞融合，得到的一部分融合杂交细胞既能继续生长，又能分泌抗羊红细胞抗体，将这种杂交细胞系统称为杂交瘤细胞，应用这种方法可制备单一抗原决定簇的单克隆抗体。一、何谓单克隆抗体？★由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体，称单克隆抗体单克隆抗体技术的核心是用骨髓瘤细胞(myelomacell)与经特定抗源免疫刺激的B淋巴细胞(a

5、ntigenstimulatedBlymphoblast)融合得到杂交瘤细胞(hybridomacell)，杂交瘤细胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖，又具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力。因此，单克隆抗体技术又称为杂交瘤技术(hybridomatechnology）。NielsK.JerneG.KohlerC.Milstein杂交瘤技术的基本原理3、基因工程抗体基因工程抗体即将抗体的基因按不同需要进行加工、改造和重新装配，然后导入适当的受体细胞中进行表达的抗体分子。基因工程抗体与单克隆抗体相比的优点

6、：通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应。基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，进入病灶的核心部位；根据治疗的需要，制备新型抗体。可以采用原核细胞、真核细胞和植物等多种表达方式，大量表达抗体分子，大大降低生产成本。整体水平抗体生成技术细胞工程抗体生成技术基因工程抗体生成技术多克隆抗体（抗血清）单克隆抗体嵌合抗体、改形抗体“小型化抗体”（单链抗体）组合抗体库技术噬菌体抗体库技术Ig基因转基因小鼠抗体真核表达技术经过免疫的哺乳类动物单一的B淋巴细胞，可

7、以合成分泌单一性的抗体，我们称这种具有特异性的、同质性的抗体为单克隆抗体。二、McAb技术基本原理改变B淋巴细胞遗传特性建立永久生长和能分泌McAb细胞系的途径病毒转化细胞杂交骨髓瘤细胞选择骨髓瘤细胞本身不能分泌抗体选择次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖激酶缺陷型（HGPRT-）胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）*融合细胞的选择原理1964年Litterlefield首先发明HAT选择性培养基。H：Hypoanthine次黄嘌呤A：Aminopterin氨基喋呤T：Thymidine胸腺嘧啶脱氧核苷原理：正常细胞不

8、但具有利用培养液中的谷酰胺和尿核苷单磷酸合成DNA的能力,且当这条主要途径被氨基喋呤（A）阻断时，还具有利用培养液中现成的次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶脱氧核苷（T）在次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）的作用下，借此替代通路来合成DNA的能力。三、McAb技术的特点1、高度特异性2、高度稳定性3、高抗体活性4、不可知性5、过于单一性★四、McA制备的基本方法（一）抗原提纯与动物免疫（二）骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备对数生长期的骨髓瘤细胞SP