预购2018年度动物疫病监测诊断试剂清单.doc

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1、预购2018年度动物疫病监测诊断试剂清单序号种类参数数量单价金额1口蹄疫O型ELISA试剂盒1.阻断ELISA2.保存条件:2~8℃保存;3.敏感性:98%4.特异性:99.2%5.稳定性:批内及批间差异≤3%。6.试剂盒规格:480孔(5板)/盒7.试剂盒组成:rP13C蛋白包被板,样品稀释液,阴性对照血清,阳性对照血清,酶标抗体,底物液,终止液,洗液。8.操作时间:2小时15操作步骤:(1)、使用前将试剂盒所有的组成恢复到室温(25+3℃),取出抗原被板;(2)、标记好样品、阳性对照和阴性对照(对照各做两孔),每孔加入样品稀释液80ul,然后加入

2、样品血清、阳性对照、阴性对照各20ul后进行震荡混匀;(3)、室温孵育60分钟;(4)、洗板:每孔加入洗液300ul,洗涤3次,最后在吸水纸上拍干;(5)、每孔加入100ul酶标抗体,室温孵育60分钟;(6)、洗涤3次;(7)、每孔加入TMB底物反应液100ul.室温暗处放置15分钟。(8)、每孔加入终止液50ul,置酶标仪450nm波长处读数。9.结果判定:SN值>0.6,阴性;SN值≤0.6,阳性。10.试剂盒有效期12个月。3盒2口蹄疫A型ELISA试剂盒1.阻断ELISA2.保存条件:2~8℃保存;3.敏感性:98%4.特异性:99%5.稳定

3、性:批内及批间差异≤3%。6.试剂盒规格:480孔(5板)/盒7.试剂盒组成:rP13C蛋白包被板,样品稀释液,阴性对照血清,阳性对照血清,酶标抗体,底物液,终止液,洗液。8.操作时间:2小时15分钟。(1)、使用前将试剂盒所有的组成恢复到室温(25+3℃),取出抗原被板;(2)、标记好样品、阳性对照和阴性对照(对照各做两孔),每孔加入样品稀释液80ul,然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20ul后进行震荡混匀;(3)、室温孵育60分钟;(4)、洗板:每孔加入洗液300ul,洗涤3次,最后在吸水纸上拍干;(5)、每孔加入100ul酶标抗体,室温孵

4、育60分钟;(6)、洗涤3次;(7)、每孔加入TMB底物反应液100ul.室温暗处放置15分钟。(8)、每孔加入终止液50ul,置酶标仪450nm波长处读数。9.结果判定:SN值>0.6,阴性;SN值≤0.6,阳性。10.试剂盒有效期12个月。2盒3口蹄疫亚1型ELISA液相阻断试剂盒1、规格:(10板*96孔)/盒,可检测100~200份样品。2、用途:用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫亚洲Ⅰ型病毒抗体,适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。3、试剂盒主要组成:(1)兔抗包被ELISA板10块;(2)U型96孔抗原抗体反应板2块;(3)移液槽5个;

5、(4)口蹄疫亚洲I型病毒抗原约2瓶,7ml/瓶;(5)口蹄疫亚洲I型豚鼠抗体工作液1瓶,55ml;(6)兔抗豚鼠IgG-HRP工作液1瓶,55ml;(7)口蹄疫亚洲I型阳性对照血清1管,1ml;(8)口蹄疫阴性对照血清1管,1ml;(9)25倍PBST浓缩洗液3瓶,180ml/瓶;(10)TMB底物A、B溶液,各1瓶,30ml/瓶;(11) 终止液1瓶,50ml;(12)封膜板10张。4、操作步骤4.1.抗原抗体(阴阳性对照血清及待检血清)反应:根据不同的需要,选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。图1为抗体效价测定(定量)检测10份样品布

6、局图;图2为抗体滴度测定(定量)检测20份样品布局图。4.1.1 稀释血清:以图1为例操作,在U型反应板上,以50μl/孔的量用1×PBST2倍连续稀释血清,被检血清在第1~10列从1:4(即A1~A10孔,75μl1×PBST加25μl被检血清)稀释至1:512;在第11列稀释阳性对照血清,从1:2(即A11孔50μl1×PBST加50μl阳性对照血清)稀释至1:256;A12~B12孔稀释阴性对照血清,从1:2稀释至1:4;E12~H12孔为病毒抗原对照孔。4.1.2加病毒抗原:将病毒抗原4.1.2用1×PBST稀释至工作浓度,以50μl/孔的量

7、加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内,4孔病毒抗原对照孔仅加入100μl/孔稀释至工作浓度的病毒抗原。加入等量的病毒抗原后,血清的稀释度加倍,被检血清从1:8~1:1024,由于阳性对照血清已经预先作了8倍稀释,则变为1:32~1:4096。封板,振荡,4℃静置过夜或37℃温育90分钟。4.2.将抗原抗体混合液从U型反应板上按次序转移至已包被口蹄疫亚洲Ⅰ型兔抗的ELISA板上,50μl/孔,封板,37℃温育60分钟。4.3.洗板5次,甩干,按50μl/孔加口蹄疫亚洲Ⅰ型豚鼠抗体工作液(红色),封板,37℃温育30分钟。4.4.同上洗板5次,甩

8、干,按50μl/孔加兔抗豚鼠-IgG-HRP工作液(蓝色),封板,37℃温育30分钟。4.5.同上洗板5次,

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