预购2018动物疫病监测诊断试剂清单

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1、预购2018年度动物疫病监测诊断试剂清单序号种类参数数量单价金额1口蹄疫O型ELISA试剂盒1．阻断ELISA2．保存条件：2~8℃保存；3．敏感性：98%4．特异性：99.2%5．稳定性：批内及批间差异≤3%。6．试剂盒规格：480孔（5板）/盒7．试剂盒组成：rP13C蛋白包被板，样品稀释液，阴性对照血清，阳性对照血清，酶标抗体，底物液，终止液，洗液。8．操作时间：2小时15操作步骤：（1）、使用前将试剂盒所有的组成恢复到室温（25+3℃），取出抗原被板；（2）、标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔加入样品稀释液80ul，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20ul后进行

2、震荡混匀；（3）、室温孵育60分钟；（4）、洗板：每孔加入洗液300ul，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；（5）、每孔加入100ul酶标抗体，室温孵育60分钟；（6）、洗涤3次；（7）、每孔加入TMB底物反应液100ul.室温暗处放置15分钟。（8）、每孔加入终止液50ul，置酶标仪450nm波长处读数。9．结果判定：SN值＞0.6，阴性；SN值≤0.6，阳性。10．试剂盒有效期12个月。3盒2口蹄疫A型ELISA试剂盒1．阻断ELISA2．保存条件：2~8℃保存；3．敏感性：98%4．特异性：99%5．稳定性：批内及批间差异≤3%。6．试剂盒规格：480孔（5板）/盒7．试剂盒组成：rP13C

3、蛋白包被板，样品稀释液，阴性对照血清，阳性对照血清，酶标抗体，底物液，终止液，洗液。8．操作时间：2小时15分钟。（1）、使用前将试剂盒所有的组成恢复到室温（25+3℃），取出抗原被板；（2）、标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔加入样品稀释液80ul，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20ul后进行震荡混匀；（3）、室温孵育60分钟；（4）、洗板：每孔加入洗液300ul，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；（5）、每孔加入100ul酶标抗体，室温孵育60分钟；（6）、洗涤3次；（7）、每孔加入TMB底物反应液100ul.室温暗处放置15分钟。（8）、每孔加入终止液50ul，置酶

4、标仪450nm波长处读数。9．结果判定：SN值＞0.6，阴性；SN值≤0.6，阳性。10．试剂盒有效期12个月。2盒3口蹄疫亚1型ELISA液相阻断试剂盒1、规格：（10板*96孔）/盒，可检测100～200份样品。2、用途：用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫亚洲Ⅰ型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。3、试剂盒主要组成：(1)兔抗包被ELISA板10块；(2)U型96孔抗原抗体反应板2块；(3)移液槽5个；(4)口蹄疫亚洲I型病毒抗原约2瓶，7ml/瓶；(5)口蹄疫亚洲I型豚鼠抗体工作液1瓶，55ml；(6)兔抗豚鼠IgG-HRP工作液1瓶，55ml；(7)口蹄疫亚洲I型阳性对照

5、血清1管，1ml；(8)口蹄疫阴性对照血清1管，1ml；(9)25倍PBST浓缩洗液3瓶，180ml/瓶；(10)TMB底物A、B溶液，各1瓶，30ml/瓶；(11) 终止液1瓶，50ml；(12)封膜板10张。4、操作步骤4.1．抗原抗体（阴阳性对照血清及待检血清）反应：根据不同的需要，选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。图1为抗体效价测定（定量）检测10份样品布局图；图2为抗体滴度测定（定量）检测20份样品布局图。4.1.1 稀释血清：以图1为例操作，在U型反应板上，以50μl/孔的量用1×PBST2倍连续稀释血清，被检血清在第1～10列从1:4（即A1～A10孔，75μl1×

6、PBST加25μl被检血清）稀释至1:512；在第11列稀释阳性对照血清，从1:2（即A11孔50μl1×PBST加50μl阳性对照血清）稀释至1:256；A12～B12孔稀释阴性对照血清，从1:2稀释至1:4；E12～H12孔为病毒抗原对照孔。4.1.2加病毒抗原：将病毒抗原4.1.2用1×PBST稀释至工作浓度，以50μl/孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，4孔病毒抗原对照孔仅加入100μl/孔稀释至工作浓度的病毒抗原。加入等量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，被检血清从1:8～1:1024，由于阳性对照血清已经预先作了8倍稀释，则变为1:32～1:4096。封板，振荡，4

7、℃静置过夜或37℃温育90分钟。4.2.将抗原抗体混合液从U型反应板上按次序转移至已包被口蹄疫亚洲Ⅰ型兔抗的ELISA板上，50μl/孔，封板，37℃温育60分钟。4.3.洗板5次，甩干，按50μl/孔加口蹄疫亚洲Ⅰ型豚鼠抗体工作液（红色），封板，37℃温育30分钟。4.4.同上洗板5次，甩干，按50μl/孔加兔抗豚鼠-IgG-HRP工作液（蓝色），封板，37℃温育30分钟。4.5.同上洗板5次，