尿脱落细胞端粒酶催化亚基mrna检测在膀胱癌诊断和监测复发中的意义

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1、尿脱落细胞端粒酶催化亚基mRNA检测在膀胱癌诊断和监测复发中的意义作者：柯尊金，丁心喜，朱伟，孙波　曾甫清【摘要】目的探讨尿脱落细胞端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)mRNA检测在膀胱癌早期诊断和监测复发中的应用价值。方法采用逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptasePCR,RT-PCR)检测42例膀胱癌、38例膀胱良性疾病患者和12例健康体检者晨尿中脱落细胞hTERTmRNA的表达，并与尿脱落细胞学检查结果比较；随访观察其中37例膀胱癌术后尿液hTERTmRNA变化与复发的

2、关系。结果hTERT检测膀胱癌的敏感性为97.62%，显著高于尿脱落细胞学检测的61.9%(P<0.05)；特异性为96%，与尿脱落细胞学检测98%无明显差异(P>0.05)；膀胱癌患者术前hTERTmRNA表达强度明显高于膀胱良性疾病患者和对照组(P<0.05)；且随肿瘤恶性程度的增加逐渐升高，G1、G2、G3(V逆转录酶购自美国promega公司。hTERT引物序列参考1.3.5统计学分析实验数据采用x±s表示，率比较采用χ2检验，两组间均数比较采用t检验，多组间均数比较采用q检验，α=0.05为检验水准。采用SPSS13.0统计软件进

3、行统计学分析。2结果42例膀胱癌患者尿脱落细胞中41例检出hTERT基因145bp条带，阳性检出率97.62%；38例泌尿系良性疾病和12例健康体检者尿液标本中仅1例膀胱乳头状瘤患者表达阳性，阴性检出率96%。G1、G2、G3膀胱癌患者尿脱落细胞中hTERT平均灰度值分别为0.63±0.14、0.75±0.16、0.87±0.20。膀胱良性疾病与膀胱癌患者之间尿脱落细胞中hTERT平均灰度值差异有统计学意义(P<0.05)，hTERT平均灰度值随膀胱癌分级增加而升高(图1)，各级间hTERT平均灰度值差异有统计学意义(P<0.05)。hTERT检

4、测膀胱癌的敏感性为97.62%(41/42)，显著高于尿脱落细胞学检测的61.9%(26/42)，P值<0.05，特异性为96%(48/50)与尿脱落细胞学检测的98%(49/50)无明显差异(P>0.05)。动态监测其中37例膀胱癌术后患者尿液hTERTmRNA表达强度(表1)。表1膀胱癌患者尿液hTERTmRNA表达强度动态变化3讨论端粒酶是近年来研究较多的肿瘤标记物之一，目前普遍认为端粒酶的激活与肿瘤发生、发展密切相关。绝大部分恶性肿瘤组织均有明显的端粒酶活性，而正常细胞、部分良性肿瘤组织和非永生细胞系中则无或仅有极低的端粒酶活性［2］。端

5、粒酶由端粒RNA亚基(humantelomeraseRNA,hTR)、端粒酶相关蛋白及具有逆转录酶活性的端粒酶催化亚基(hTERT)三部分组成，前二者在组织中表达广泛，而hTERT仅在肿瘤组织中表达。hTERT基因位于5p15.33，长度约为40kb，分子质量为127ku的核蛋白，其功能是催化激活端粒酶，在调节端粒酶活性中起关键作用。检测hTERT比端粒酶活性具有更高的特异性和灵敏度［3］。研究表明，膀胱癌早期和进展期均存在hTERT基因异常表达，其表达强弱与肿瘤分化和进展有关，有复发倾向的病例比没有复发的病例高［4］，且膀胱癌细胞中端粒酶活性能够被茶多酚抑

6、制，从而导致肿瘤细胞的端粒缩短，诱导肿瘤细胞凋亡［5］。本实验结果发现，几乎所有膀胱癌患者尿脱落细胞中均有hTERT异常表达，且其表达强度随着膀胱癌分级增加而增强，而健康者不表达hTERT，膀胱良性疾病只有较少及弱的hTERT表达，动态监测膀胱癌患者术后hTERT表达强度发现有复发倾向的患者其表达强度逐渐增强，提示hTERT可能在膀胱癌的发生、发展中发挥重要调节作用，hTERT可作为早期诊断膀胱癌和监测其复发的重要生物学指标。用人RT-PCR扩增尿脱落细胞中mRNA的可靠程度较高，即使在微量mRNA模板条件下，仍能扩增出目的片段［6］。采用RT-PCR检测尿

7、脱落细胞hTERTmRNA对诊断膀胱癌具有与传统尿液脱落细胞学检查同样的特异性，而且更敏感，这与