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《糖皮质激素受体在翼状胬肉中的表达及意义论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、糖皮质激素受体在翼状胬肉中的表达及意义论文戚朝秀,王晓黎,李奇根,邓娟,叶辉【摘要】【目的】检测糖皮质激素受体-α、β(GR-α、GR-β)在翼状胬肉组织中的表达，探讨其在翼状胬肉发病机制中的作用。【方法】取39例翼状胬肉组织（其中初发30例，复发9例），应用荧光定量逆转录PCR定量检测GR-α、βmRNA的表达，应用ethods】GR-αandGR-βmRNAexpressionefluorescentquantitativeRT-PCR.GR-αandGR-βproteinexpressioninedby-CCTGATGGCACTTAGCTATCAGAAGAC
2、CACAA-TAMRA-3′。糖皮质激素受体-β扩增引物及荧光探针序列如下：上游引物，5′-TGGCCACCCCAAAAGGA-3′；下游引物，5′-GAGCTCATCCCATGCTAATTATCC-3′；荧光探针，5′-FAM-AACTAACATGATTTGTGTCTATGAAGTGC-TAMRA-3′。引物和荧光探针由中山大学达安基因公司合成。1.2.2gCl2，10mmol/LEDTA，100mmol/LNaCl，1mmol/LDTT和蛋白酶抑制剂），匀浆、超声破碎后，将组织匀浆液加热变性，高速离心后取上清液，DC法测量蛋白质浓度。在Bio-Rad垂直电泳仪
3、中灌注质量分数12％分离胶和质量分数5％浓缩胶，加入不同组样本，稳压120V电泳90min，然后在转膜仪上将凝胶上的蛋白转移到PVDF膜上，稳压100V转移60min，然后用7％脱脂牛奶封闭60min，分别加入兔多克隆抗人GR-?琢、GR-?茁抗体（1∶1000;美国SantaCruz公司sc-1002）4℃过夜，次日加入山羊抗兔孵育2h，ECL化学发光剂作用后在暗室中曝光、显影、定影、观察结果，?茁-actin作为内参照。1.2.3免疫组化染色采用链亲合素-生物素-过氧化酶(LsAB)法。石蜡切片经梯度酒精脱蜡至水。0.45mol/LH2O2避光处理25min阻
4、断内源过氧化酶,普通高压锅加压法修复。羊血清封闭15min,加1∶700稀释的GR-α抗体(兔抗人多克隆抗体,美国SantaCruz公司sc-1002)37℃孵育3h,PBS洗,再分别加1∶300稀释的生物素化兔抗IgG及1∶300稀释的链亲合素-辣根过氧化物酶复合物(北京中山公司),于37℃各孵育45min,DAB(Sigma公司)显色,苏木素复染,梯度酒精脱水二甲苯透明,中性树胶封片。1.2.4结果判定标准和统计学分析免疫组化根据组织细胞(上皮细胞+间质炎性细胞)中阳性呈色面积所占其总面积的百分比和染色强度分别记为：(-)无明显阳性反应细胞；(+)组织细胞呈棕
5、黄色。免疫组化半定量标准每张切片随机观察5个高倍视野,计算出每张切片上阳性细胞百分数,阳性细胞数10%为阴性,≥10%为阳性。实时荧光定量逆转录PCR结果用ABI7000soft,USA)处理。率的差异显著性用?字2检验进行统计学分析，实验所得数据用均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，两个样本均数间的比较采用t检验，两组以上样本均数间比较采用完全随机设计的单因素方差分析，以P＜0.05为差异有显著性，所有操作均以SPSS11.0for-AREZA,etal.Glucocorticoidreceptorcounteractstumorigenicactivityofakti
6、nskinthroughinterferenceRNAJ.BrainResBull,2003,62(3):173-178.张孝文,李鹏,李源，等.甲状腺瘤组织中糖皮质激素受体-αmRNA的表达J.中华实验外科杂志,2005,16(12):420-422.张孝文,李鹏,李源，等.糖皮质激素受体-αmRNA在腮腺多形性腺瘤中的定量检测J.中国耳鼻咽喉头颈外科杂志,2005,12(6):413.PUJOLSL,MULLOLJ,ROCA-FERRERJ,etal.Expressionofglucocorticoidreceptoralpha-andbeta-isoform
7、sinhumancellsandtissuesJ.AmJPhysiol,2002,283(4):1324-1331.SOUSAAR,LANESJ,CIDLOERONME.Histologyofpterygium:anelectronmicroscopicstudyJ.BrJOphthalmol,1983，67(9):604-608.CHENJK,TSAIRJ,LINSS.FibroblastsisolatedfromhumanpterygiaexhibittransformedcellcharacteristicsJ.InVitroCellDevBiolAnim,
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