蹄叶橐吾乙醇提取物对肝细胞色素p450的影响论文

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1、蹄叶橐吾乙醇提取物对肝细胞色素P450的影响论文【摘要】目的研究蹄叶橐吾乙醇提取物对大鼠和小鼠肝细胞色素P450（CYP450）的影响。方法蹄叶橐吾乙醇提取物口服给药后，观察其对小鼠戊巴比妥钠催眠作用的影响、对大鼠肝微粒体CYP450含量、肝脏指数的影响，采用HPLC测定探针药的代谢率观察其对大鼠肝CYP450的7种亚型酶活性的影响。结果蹄叶橐吾乙醇提取物对戊巴比妥钠诱导小鼠的睡眠时间无影响，大鼠肝CYP450含量及肝脏指数无显著变化，对大鼠肝CYP450的7种亚型探针药的代谢率亦无影响。结论蹄叶橐吾乙醇提取物对肝

2、药酶无诱导作用。【关键词】蹄叶橐吾；肝细胞色素P450；诱导作用细胞色素P450（cytochromeP450,CYP450）是生物体内参与各类外源性及内源性物质代谢的主要酶系，负责90%以上药物的生物转化。CYP450的活性可受到多种因素的影响。近年来，由于药物代谢性相互作用诱发的不良反应日渐引起人们的重视。但有关中草药对CYP450影响作用的报道尚不多见。蹄叶橐吾（Ligulariafischeri）为菊科（pasitae）橐吾属(Ligularia)多年生草本植物，又名肾叶橐吾（《中药志》）、马蹄叶（东北）等

3、.freelLigulariafischeri，以下简写为Lfe）的制备：蹄叶橐吾地上部分晾干、粉碎，用95%乙醇加热回流提取，滤液加水放置24h，过滤后用石油醚萃取，水层加热浓缩至浸膏，每克相当于20g生药，实验用其水溶液灌胃给药。1.2试剂非那西汀（phenacetin），双氯酚酸（Diclofenac），奥美拉唑（Omeprazole），氢溴酸右美沙芬（DextromethorphanHydrobromide），氯唑沙宗（Chlorzoxazone），氨苯砜（Dapsone,aminophenylsulfon

4、e）均购于中国药品生物制品检定所,香豆素（Coumarin）购于沈阳市试剂三厂（化学纯）。葡萄糖-6-磷酸（D-Glucose6-phosphatedisodiumsalthydrate）、氧化型辅酶Ⅱ(β-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphatesodiumsalthydrate,β-NADP)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphateDehydrogenase)购于sigma公司。戊巴比妥钠，Serva进口分装（上海化学试剂分装厂）。HPLC级甲醇、

5、乙腈购于美国Fisher公司。1.3仪器美国ThermoFinnigansurveyor高效液相色谱仪（配有四元泵、自动进样器、二极管阵列检测器）；Xcalibur1.4色谱工作站；AgilentXDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；日本岛津ShimadzuUV-260紫外可见光分光光度计；MQX-200酶标仪（美国Bio-TekInstrumentsInc.）；EYELA旋转蒸发仪（N-1000SD-2000）；BECKMAN公司高速冷冻离心机；2K-15型高速离心机(Sigma)；YKH-3型

6、液体快速混合器（江西医疗器械厂）；瑞士METLERTOLEDO公司AG135型电子天平。1.4动物昆明种雄性小鼠，体质量（20±2）g；S缓冲液（含0.05mol·L-1Tris，3mmol·L-1MgCl2，0.2mol·L-1蔗糖，pH7.4）匀浆后于4℃，10000g，离心30min，取上清液转移至超速离心管内，4℃离心，100000g，60min，沉淀即为肝微粒体。重悬后分装，置-80℃冰箱内保存备用。微粒体蛋白浓度采用Bradford法测定［10］。2.2.2CYP450含量及肝脏指数的测定采用Omura

7、和Sato的方法测定CYP450含量［11］。P450(nmol·mg-1蛋白)=［ΔA(450nm-490nm)×1000］/91×蛋白浓度（mg·ml-1）。计算肝脏指数，肝脏指数（g/100g体质量）=（肝重/体质量）×100%。2.2.3肝微粒体体外温孵实验将Lfe给药组8只大鼠的微粒体蛋白稀释至相同浓度后等体积混合，分装至各管。对照组大鼠微粒体亦作相同处理。将探针药香豆素（CYP2A6底物）、右美沙芬（CYP2D6底物）、双氯酚酸（CYP2C9底物）、奥美拉唑（CYP2C19底物）、氨苯砜（CYP3A4底

8、物）、非那西汀（CYP1A2底物）、氯唑沙宗（CYP2E1底物）分别与给药组或对照组大鼠的肝微粒体于37℃温孵。以pH7.4的Tris-Hcl缓冲液0.5ml为总反应体系，其中肝微粒体蛋白浓度1mg·ml-1，NADPH生成系统(NADP1mmol·L-1,葡萄糖-6-磷酸10mmol·L-1，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶1U·ml-1)，MgCl24mmol·L