紫球藻多糖的分离纯化与其理化性质分析

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1、摘要紫球藻（Porphyridiumcruentum.）在生长过程中能产生高活性的硫酸多糖，该多糖的提取制备是研究其活性的重要前提。为提高多糖的提取率，本文采用正交试验设计及二元二次回归正交组合试验方法对影响紫球藻多糖提取率的工艺条件进行了优化，并对脱蛋白工艺进行了比较。在分离纯化的基础上得到一种均一的多糖组份，利用化学方法和波谱技术对其理化性质进行了分析，对其结构进行了初步鉴定，取得的成果如下：（1）获得了优化的提取工艺：料液比1:4、温度84℃、提取时间2.1h、pH8.0，在此条件下多糖的产量达到4.21g/L；通过对三氯乙酸（TCA）法、Sevag法

2、和酶法脱蛋白工艺的比较表明TCA法3次脱蛋白效果较佳，酶解法次之，Sevag法较差。（2）经DE52纤维素离子交换柱及SephacrylTMS-400凝胶过滤层析柱纯化获得了多糖PSP，经高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）、纸层析鉴定，表明为均一多糖组分，测得相对分子质量为2.61×106Da。（3）经测定PSP的总糖含量为92.6%，糖醛酸的含量为7.8%，硫酸基的含量为11.4%，紫外光谱（UV）表明样品不含游离或裸露的蛋白质和核酸；PSP具有良好的流变学特性，其低浓度的水溶液就具有很高的粘度，具有剪切稀释效应，呈现典型的非牛顿流体特征；其流变学特性非常稳

3、定，不受温度、pH、盐度等环境条件的影响。（4）红外光谱（IR）表明PSP具有多糖的特征吸收峰，为硫酸化多糖，且提示有ß-D-葡萄吡喃糖存在；气相色谱（GC）分析表明该多糖由木糖（Xyl）、葡萄糖（Glc）和半乳糖（Gal）组成，为一种杂多糖，其摩尔比为：2.96：1.25：3.06。关键词：紫球藻；多糖；提取工艺；优化；理化性质IAbstractThemarinemicroalgaPorphyridiumcruentumcansynthesizeandsecretethesulfatedpolysaccharideswhenthecellgrowstoit

4、ssteadyperiod.Theextractionofthepolysaccharideisanimportantprocessforactivityresearch.Inordertooptimizetheextractioncraftofpolysaccharide,theorthogonalexperimentandregressionanalysiswereusedtoinvestigatetheeffectfactors.Besides,differentcraftsofdeproteinizationwerecomparied.Ontheba

5、sisofseparationandpurificationofpolysaccharidesfromP.cruentum(PSP),thephysicochemicalpropertiesandstructureofPSPweredeterminedbychemicalmethodsandspectrumanalysis.Alltheresultsweresummarizedasfollows:(1)Theoptimumextractingconditionwasratioofmaterialandwater1:4,temperature84℃,extra

6、ctingtime2.1handpH8.0.Undertheoptimalextractingcondition,themaximumyieldofPSPwas4.21mg/L.TheresultsofremovingproteinshowedthatthemethodofTCAhadthebesteffect,thenextwasthemethodofenzyme,andthelastwasmethodofSevag.(2)TheuniformpolysaccharideswereobtainedbyDE52anion-exchangechromatogr

7、aphyandSephacrylS-400gelfiltrationchromatography.ThepurityofPSPwasdeterminedbyHPGPCandpaperchromatography,andthemolecularweightofPSPwas2.61×106Da.(3)AnalysisresultsofphysiochemicalpropertiesshowedthatthetotalsugarcontentofPSPwas92.6%,thealdonicacidcontentwas7.8%andthesulfuricconten

8、twas11.4%.TheUVanalysissho