《浅谈基质效应》ppt课件

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1、浅谈基质效应基质效应产生的原因和影响基质效应的确认方法基质效应的消除浅谈基质效应基质效应的产生原因基质效应的产生原因所谓基质，指标本中除分析物以外的一切组成。以测定血中红霉素的浓度为例，除了红霉素之外的蛋白、磷脂及其他内源性物质皆为基质。基质效应，按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）文件的定义为① 标本中除分析物以外的其他成分对分析物测定值的影响；② 基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。广义说来，基质效应也应包括已知的干扰物（如红霉素测定中磷脂、血红蛋白、抗坏血酸等都是干扰物），但目前只将基质效应限于生物材料中未知或未定性的物质或因素（如粘度、pH等）的影

2、响。基质效应的产生原因主要针对使用液相色谱-质谱联用技术分析生物样品中的化合物所产生的基质效应进行讨论。而在生物样品（以血浆为例）中，引起基质效应的主要是磷脂、胆固醇等内源性物质。他们随同待测物从色谱柱上一起被洗脱出来，经离子源气化，进入质谱进行检测分析。而就在液滴气化、发生库伦爆炸变成小液滴直至产生气体离子的过程中，这些内源性的物质由于极性较大，会同待测物离子竞相竞争液滴表面，从而导致待测物的离子化效率降低或增强，引起响应降低或增高，这就产生所谓的基质抑制或基质增强效应。根本原因是什么？基质效应会产生哪些不好的影响基质效应的产生原因标准曲线法柱后灌注法监控法基质效应的确认

3、方法样品配制方法：配制三种不同的标准曲线（每条标准曲线7个点，每一种配制方法五样本）1、药物+内标：用流动相稀释到一定浓度2、药物+内标：用含有5种不同来源的空白生物样品的流动相稀释3、正常配制的生物样品标准曲线法评价方法：通过比较3组标准曲线待测组分的绝对响应值、待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影响。标准曲线法绝对响应值比较第1组测定结果可评价色谱系统和检测器的性能以及整个系统的重现性。第2组测定结果同第1组测定结果相比，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应的影响。第3组测定结果，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增

4、加，表明存在基质效应和提取回收率因血浆来源不同而不同的共同影响。标准曲线法绝对响应值比较如果将第1组、第2组和第3组测得的相应的响应值分别用A、B、C表示，可按下列公式分别计算基质效应(ME)，提取回收率(RE)和方法效率(PE)：ME(％)=B／A×100…………(1)RE(％)=C／B×100…………(2)PE(％)=C／A×100=(ME×RE)／100…………(3)公式(1)计算得到的ME为绝对基质效应。相对基质效应通过对不同来源样品间的B值进行比较获得。当ME值等于或接近100时，表明不存在基质效应的影响；当ME值大于100时，表明存在离子增强作用；当ME值小于1

5、00时，表明存在离子抑制作用。标准曲线法待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率StandardlineslopesasameasureofarelativematrixeffectingquantitativeHPLC–MSbioanalysisTheresultsofthesestudiesindicatedthatthevariabilityofstandardlineslopesindifferentlotsofabiofluid[precisionofstandardlineslopesexpressedascoefficientofvariation,CV(%

6、)]mayserveasagoodindicatorofarelativematrixeffectand,itissuggested,thisprecisionvalueshouldnotexceed3–4%forthemethodtobeconsideredreliableandfreefromtherelativematrixeffectliability.标准曲线法另外，有学者建议使用低、中、高三浓度的质量控制样品（QC）来评价基质效应的大小；有人建议使用定量下限（LLOQ）水平的6个个体的基质来评价。标准曲线法将空白生物样品的提取液和空白溶剂分别进样进行液质分析，同

7、时利用注射泵将含相同浓度待测物的标准溶液通过色谱柱与质谱接口之间的三通注入到色谱柱流出液中。如果同空白溶剂的萃取离子图谱相比，空白提取液的萃取离子图谱的响应信号明显减弱或增强，则表明存在基质效应的影响。柱后灌注法(Post-columninfusionmethod)柱后灌注法样品配制：分别用液液萃取（正己烷-异丙醇）、固相萃取、沉淀蛋白（乙腈沉淀和高氯酸沉淀）1、正常配制空白样品2、用水代替血浆配制样品3、流动相柱后灌注法液液萃取ESI固相萃取乙腈沉淀高氯酸沉淀液液萃取固相萃取乙腈沉淀高氯酸沉淀APCI由于基质效应