解毒通络注射液对缺血再灌注大鼠脑水肿防治作用

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1、解毒通络注射液对缺血再灌注大鼠脑水肿防治作用[摘要]目的:研究解毒通络注射液(JieduTongluoinjection,JDTL)对缺血性再灌注大鼠脑组织含水量变化以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)、E-选择素(E-selectin)、基质金属蛋白酶-9(画P-9)表迗的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法:线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,干-湿重法检测脑组织含水量;采用比色法测定脑组织中伊文思蓝(Evansblue,EB)含量反映血脑屏障通透性;酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑组织

2、中ICAM-1,VCAM-1,E-selectin表迗;免疫组化法检测脑组织丽P_9表达。结果:JDTL2,4mL-kg_l可明显降低模型大鼠的脑组织含水量,EB含量,ICAM-1,VCAM-1,E-selectin以及MMP-9的表迖(P2.6解毒通络注射液对MCA0大鼠画P-9表达的影响于再灌注24h后,麻醉后常规胸腹联合切口,经左心室插管,分别用生理盐水、4%多聚甲醛的0.1mol-L-1磷酸盐缓冲液灌注固定,断头取脑,浸于4%多聚甲醛溶液内固定72h后,自视交叉处开始向后取冠状切片,石蜡包埋,在切片机上连续切片,片厚6um,60°C烘烤12h。

3、MMP免疫组织化学染色按SABC免疫组化试剂盒说明书步骤操作,其中以已知的阳性片染色作为阳性对照,阴性对照片用PBS代替一抗,其余步骤相同。每张切片在光镜下(X400)分别选取3个视野,采用HPIAS-2000高清晰度彩色病理图像分析系统进行分析,每张切片在缺血区域选取同一部位随机摄取3个视域,统计每个视域的积分吸光度(图像分析时在相同的背底灰度下进行,以保证结果的可比性)。2.7统计方法采用SPSS11.5软件做统计分析,各组实验数据以土s表示,组间差异比较用One-WayANOVA分析统计。3结果3.1对大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型脑含水量和脑微血

4、管伊文思蓝(EB)通透性的测定缺血2h再灌24h后,与假手术组比较,模型组缺血侧脑水含量明显增高(P解毒通络注射液对脑缺血再灌注后血脑屏障破坏、脑水肿具有较为明显的对抗作用,通过抑制ICAM-1,VCAM-1及E-selectin的表迗,抑制MMP-9的表迖可能是其主要的作用机制。[参考文献][1]邹忆怀.“毒损脑络”学说的症状学研究思路探讨[J].中医脑病杂志,2006,2(2):67.[2]杨鸿,赵宜军,王永炎.解毒通络注射液对MCAO大鼠脑组织炎性细胞因子的影响[J].中国中药杂志,2008,33(23):2817.[1]KoizumiJ,Yos

5、hidaY,NakazawaT,etal.Experimentalstudiesofischemiabrainedema,I:anewexperimentalmodelofcerebralembolisminratsinwhichrecirculationcanbeintroducedintheischemicarea[J].JpnJStroke,1986,8:1.[2]NagasawaH,KogureK.Correlationbetweencerebralbloodflowandhistologicchangesinanewratmodelofmid

6、dlecerebralarteryocclusion[J].Stroke,1989,20(8):1037.[3]BetzAL,CoesterHC.Effectofsteroidsonedemaandsodiumuptakeofthebrainduringfocalischemiainrats[J].Stroke,1990,21(8):1199.[4]KuroiwaT,TingP,MartinezH,etal.Thebiphasicopeningoftheblood-brainbarriertoproteinsfollowingtemporarymidd

7、lecerebralarteryocclusion[J].ActaNeuropathol,1985,68(2):122.[5]SimundicAM,BasicV,TopiceE,etal.Solubleadhesionmoleculesinacuteischemicstroke[J].ClinInvestMed,2004,27(2):86.[6]StoriniC,RossiE,MarrellaV,etal.Cl一inhibitorprotectsagainstbrainischemia-reperfusioninjuryviainhibitionofc

8、ellrecruitmentandinflammation[J].NeurobiolDis,2

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