《基因工程载体》ppt课件

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1、基因工程载体Madebylionchp一分类依功能：克隆载体、表达载体、转录载体※克隆、表达的基本流程：克隆载体转录载体DNADNARNA蛋白质表达载体依组成：质粒、噬菌体、病毒、粘性载体、人工染色体※可承载基因量：依次增大依类型：原核载体：质粒、噬菌体真核载体：酵母、病毒※两类载体分泌型载体：传导入受体细胞后，表达产生蛋白产物释放出来的载体穿梭载体：传导入受体细胞后，可在各细胞间传递的载体二要求可独立复制：有复制子含多个酶切位点：利于双酶切含抗性标记基因：利于重组体筛选质量数小：可接合外源DNA

2、的量大三结构组成复制区：一个载体就是一个复制子启动子：基因可表达标志基因（例如抗药基因）：※标志基因的作用：四质粒载体结构：cccDNA（闭合、环状、共价）分类：根据复制类型严紧型：一个细菌中不能有过多的该种质粒松弛型：一个细菌中可有多个该种质粒（>20个）根据移动性（接合性）转移型（接合型）：可通过性菌毛进入另一细菌非转移型（非接合型）：不可通过性菌毛进入另一细菌根据作用F质粒：R质粒：Col质粒：命名：PBR322为例P：质粒BR：发现、构建该质粒的实验室/作者名首字母简写322：该质粒的实验

3、编号特征：一个质粒就是一个复制子不相容性：有相同复制起点和分配区的质粒不能共存于一个宿主细胞中几种常见的质粒载体PBR322：PUC18/19：PGEM-3Z：PGEM-4Z：※标志基因的应用双酶切方法：用两种不同的内切酶分别切目的片段与载体，各自得到两个不同的黏性末端作用：目的片段可按顺序接合到载体上，单酶切的载体两边是两个相同的黏性末端，目的片段结合到载体上的顺序不确定抗性筛选插入失活：目的基因插入载体时，插入到载体的标记基因当中，破坏了该基因，使此载体失去对应的抗性应避免插入失活的原因：不插

4、入失活时，培养的细胞菌落培养基中加入一种抗生素（载体上有对应抗性基因），能继续生长的菌落为阳性克隆，即我们要的菌落※插入失活后的筛选：影印法培养细胞（A、B两个培养基中菌落位置分别相等），A中加入A抗生素，B中加入B抗生素筛选出有A、B两抗性基因，但A被插入失活的重组载体：A中的且B中不死的菌落为阳性克隆，即我们要的菌落蓝白斑筛选原理：IPTG诱导LacZ（乳糖操纵子中）表达出的酶可与X-gal成蓝色吲哚产物α互补：载体上有α片段，菌体基因组中有LacZ’（LacZ缺α片段），阳性克隆菌便有完整L

5、acZ，可加IPTG诱导产生酶，加X-gal成蓝色吲哚产物蓝斑，阴性克隆菌成白斑五噬菌体载体λ噬菌体载体：M130噬菌体载体：六黏性载体七病毒载体八人工染色体细菌人工染色体：酵母人工染色体本章总结