中药制剂分析中新方法与新技术

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1、第十章中药制剂分析中新方法与新技术§1现代色谱技术顶空气相色谱法（液上气相色谱法、顶空分析法）对样品基质上方的气体成分进行GC分析来测定这些组分在原样品中的含量顶空气相色谱的分类静态顶空GC动态顶空GC§1现代色谱技术顶空气相色谱法主要特点样品前处理简单检测限低可分析含量低、组成复杂的样品适用于易挥发或易分解或无法直接进样分析的液体或固体样品的分析§1现代色谱技术顶空气相色谱法应用实例静态顶空GC(内标法)测定血液中乙醇含量对照品溶液的制备将10g/l的乙醇储备液稀释10倍，精密吸取此液1ml置于10ml顶空样品瓶中，同时

2、精密加1ml内标溶液（0.25%的正丙醇水溶液），迅速密封，即得。样品制备精密吸取1ml充分混匀的血样转移至10ml顶空样品瓶中，同时精密加1ml内标溶液（0.25%的正丙醇水溶液），迅速密封，即得。色谱条件（略）顶空分析条件平衡温度为50℃，平衡时间为10分钟（快速搅拌下），阀、输送管及定量管温度为80℃，加压为13.8kPa，加压时间、充样时间和压力平衡时间均为0.15分钟，定量管为1.0ml。§1现代色谱技术超高效液相色谱（UPLC，UltraPerformanceLiquidChromatography）主要特点固定

3、相双（三乙氧基硅）乙烷在硅胶中形成桥式乙基基团颗粒粒度小，仅为1.7μm耐压，颗粒度分布范围很窄装柱检测器响应快样品池—10mm的光程（与普通HPLC相同）而体积只有500nL（普通HPLC的20分之一）优点更高的分析速度，更好分离效果和更高的灵敏度，速度、灵敏度及分离度，分别是HPLC的9倍、1.7倍及3倍§1现代色谱技术超临界流体色谱（SFC,supercriticalfluidchromatography）以超临界流体（低黏度、高密度以及较高的扩散系数）作为流动相。对GC及HPLC的检测器均可兼容使用适用于分析GC难以

4、处理的高沸点、不挥发性样品分离速度较HPLC，分离效果更好。应用实例超临界流体色谱法测定怀牛膝制剂中齐墩果酸的含量§1现代色谱技术色谱联用技术多维色谱如：二维薄层色谱等气相色谱-质谱联用技术气相色谱-红外光谱联用技术液相色谱-质谱联用技术§2高效毛细管电泳(HPCE,highperformancecapillaryelectrophoresis)电泳:在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。1937年T

5、iselius(瑞典)利用自由溶液电泳将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白1981年Jorgenson和Luckas发展了高效毛细管电泳分离分析技术(使用75μm内径石英毛细管和采用了高达数千伏的电压)，§2高效毛细管电泳各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为：ν+=ν电渗流+ν+ef阳离子运动方向与电渗流一致ν-=ν电渗流-ν-ef阴离子运动方向与电渗流相反ν0=ν电渗流中性粒子运动方向与电渗流一致可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离分离原理电场作用下，毛细管柱中出现：电泳现象和电渗流现象。§2高效毛

6、细管电泳仪器装置电压：0～30KV。分离柱不涂敷任何固定液，紫外或激光诱导荧光检测器可检测到：10-19～10-21mol/L§2高效毛细管电泳主要特点优点高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。高灵敏度：可检测出低至10-21mol/L浓度的物质。高分析速度：可在3分钟内分离30种阴离子；1.7分钟分离19种阳离子;4分钟可分离10种蛋白质.试样用量少：仅需几nL（10-9L）的试样仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液§2高效毛细管电泳常见的毛细管电泳模式毛细管区带电泳(CZE)毛细管胶束电动色谱(M

7、ECC)（胶束作为假固定相的电动色谱）毛细管凝胶电泳(CGE)（凝胶作为支持物，起分子筛的作用）毛细管等电聚焦电泳(CIEF)（用于蛋白质、多肽等两性物质的分离）毛细管等速电泳(CITP)§2高效毛细管电泳应用离子分析药物分析手性化合物分析氨基酸分析核酸分析及DNA测序HPCE在中药制剂分析中的应用生物碱的测定、动物类药材的鉴别、指纹图谱高效毛细管电泳法测定心舒口服液中腺苷、芦丁和阿魏酸的含量对照品溶液（略）供试品溶液的配制取心舒口服液10mL，加热浓缩至约1mL，加60%甲醇定容10mL，冰箱放置过夜，经0.45mm滤膜滤

8、过备用。电泳条件以熔融石英毛细管(50mm×66.5cm，有效分离长度58cm)为分离通道，以105mmol/L硼砂液为运行缓冲液，压力进样50mpa，6s，毛细管柱温度为20℃，运行电压为0～30min:24kV，30～60min:28kV，检测波长为210nm，毛细管柱使用前以0.1m