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1、铁皮石斛的植物学特性及组培苗生产技术单芹丽杨春梅赵培飞汪国鲜 择要铁皮石斛是名贵的中药材,其生产技术倍受科研与产业人员关注。综述了铁皮石斛的生物学和生态学特性,并介绍了生产铁皮石斛组培苗的技术要点,最后针对铁皮石斛组培苗快速繁育中的常见问题,提出解决措施。 关键词铁皮石斛;植物学特性;组培苗;生产技术 AbstractDendrobiumcandidumisavaluableChineseherbalmedicine.Itsreprodutiontechnologyisconcernedbyscientistsandindustrypersonnels.Inthisp
2、aper,thebiologicalandecologicalcharacteristicsofDendrobiumcandidumonproblemsfromDendrobiumcandidumtissueculture,thesolutionscandidum;botanicalcharacteristics;seedlingpropagation;technigue 铁皮石斛(DedrobiumcandidumS+6-BA0.5～2.0mg/L+NAA0.2～0.5mg/L;(Ⅱ)培养后期壮苗和生根同步培养基:MS+NAA0.5～2.0mg/L+IBA0.2～0
3、.5mg/L。以上培养基均附加食用白糖30g/L、琼脂7.5g/L、土豆泥50～60g/L、香蕉泥50～60g/L、活性碳5～10g/L、pH值5.5～5.8。最适温度24～28℃,最适光照1500～2000Lx,光照时间为12h/d。 2.2无菌苗的获得 以野生铁皮石斛蒴果为外植体,当蒴果外表刚转为褐色,达到形态成熟而尚未开裂时采收,带入实验室用洗衣粉液清洗1min,漂洗干净后,在超净工作台中用0.1%HgCl2消毒20～25min,无菌水冲洗3～4次,每次约2min,随后将灭菌后的果荚用刀片切开,把种子撒播于培养基(Ⅰ)上,脱菌率可达90%以上。培养20～30d可看
4、到种胚明显膨大,由黄绿色转变为绿色。70d后分化为石斛小苗。2.3继代培养 把上述获得的小苗继续转接在培养基(Ⅰ)上,100d左右可发育成1.0～1.5cm高的小苗,若每隔40～50d继代1次,每次可增殖3～6倍。 2.4壮苗与生根 当芽增殖到预定数量后,在保持一定的基数条件下,小于3.0cm的丛生苗继续转接在培养基(Ⅰ)上继续增殖培养,高于3.0cm的丛生苗转入培养基(Ⅱ)上进行生根培养,每丛2～3株苗,有利于生根生长。约60d后,生根率可达到100%。当苗高5～8cm、每根根数3～5条、根长4～6cm,即可出瓶炼苗。 3组培常见问题及其解决措施 3.1常见问题
5、 铁皮石斛组培苗生长缓慢,在适宜的培养条件下,种苗生产周期一般都需10个月以上,培养过程中,生长发育表现为增殖倍数较高,从而导致植株密度过大,由此带来以下2个生产问题: 3.1.1污染。瓶苗在转接之前,由于植株生长过密,致使被污染的母瓶难以剔除,造成交叉污染,污染率迅速扩大。污染是植物组织培养中普遍存在的问题,也是影响组培苗生产成本最重要的因素之一,污染率每上升5个百分点,生产成本将递增10%以上,污染严重时,会导致整个生产流程都难以正常运转[11]。 3.1.2植株死亡。在高密度下,植株之间的竞争更加激烈,光照、营养物质都难以满足植物的正常需求,随着植株的生长,有些
6、植株开始死亡,出现“自疏现象”。 3.2解决措施 3.2.1及时转接。要降低污染,除了一般措施,如接种室、缓冲间、培养室及培养基贮藏室定期消毒,强化接种人员的“无菌操作”概念[11]外,及时转接可同时减少以上问题的发生率。管理人员要随时观察种苗的生长状况,在种苗的长势较好、生长密度有利于观察瓶苗是否已污染时,尽快转接,这样既可以截断污染源,又可以给植物及时更换生长环境,提供新的营养物质,杜绝植株死亡现象。 3.2.2控制基数。由于铁皮石斛的增殖倍数较高,但生长缓慢。常规的接种方法导致当苗高达到出瓶要求时,继代苗将增加几十倍。现有的接种工人要做到及时转接,只能不断增加劳
7、动力,由此带来的结果是种苗基数越来越大,生产流程处于一个无序状态,要解决这一矛盾,关键是控制好基数,丢弃无效苗,优选健壮植株继代。 4
