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1、外周血P53基因SNP检测与宫颈癌早期诊断的关系论文【摘要】目的分析宫颈癌发生过程中P53基因的突变作用，评估外周血P53基因突变分析作为宫颈癌高危对象筛查指标的实际应用价值。方法用LDR-PCR技术对100例宫颈上皮内瘤样病变（cervicalintraepithelialneoplasia，CIN）患者和100例健康人（对照组）的外周血P53基因第5-8外显子进行单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)检测。结果CIN组和对照组的外周血P53基因的突变率为38%和0，差异有显著性（P0.05）。结论P53基因突变在宫颈癌的发生过程中起
2、重要作用，外周血P53基因SNP突变分析可望成为宫颈癌高危对象的早期诊断手段。【关键词】宫颈肿瘤LDR-PCRSNPP53基因宫颈癌是常见的妇科肿瘤，严重地威胁着女性的生命健康。大量流行病学研究证实，人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染是宫颈癌发生发展的重要环境因素。然而在感染HPV的妇女中.freeler5软件设计引物(Sangon公司合成)。P53的引物序列5:第5外显子P1:TCTGTTCACTTGTGCCCTGACTTTC;P2:ACCCTGGGCAACCAGCCCTGTCGTC。第6外显子P1:CAGGGCTGGTTGCCCAGGGTCC
3、CCA;P2:ACTGACAACCACCCTTAACCCCTCC。第7外显子P1:CTCCTAGGTTGGCTCTGACTGT;P2:GAGGCTGGGGCACAGGCCAGTG。第8外显子P1:TAGGACCTGATTTCCTTACTGCCTC;P2:AACTGCACCCTTGGTTCTCTCCACC。1.4PCR反应扩增目的片段反应总体积25μL:其中基因组DNA约40ng，10×反应缓冲液（MgCl215mmol/L）2.5μL,dNTP（2.0mmol/L）2.0μL,上、下游引物（20μmol/L）各0.5μL,Taq酶1U。循环参数:94℃变性5min,94℃45s、
4、58℃45s、72℃45s,35个循环,72℃延伸10min。所有PCR产物均经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测确认。1.5统计学分析应用在线检测程序检测P53组与对照组，应用χ2检验统计分析P53组和对照组基因型频率及等位基因频率。P0.05,差异有统计学意义。2结果CIN组成员突变率：100例CIN组外周血淋巴细胞基因DNA经LDR-PCR分析，结果显示38例有P53基因突变，突变率为38%。100例健康人（对照组）外周血未发现P53基因突变。经统计学分析（P0.05）。在所观察的第5-8外显子中，以第8外显子突变率18%（18/100）为最高，其次为第7外显子14%（14/100
5、）和第5外显子6%（6/100），未发现第6外显子突变。结果如表一表一实验组和对照组在各个外显子中的突变数3讨论P53基因是一种重要的肿瘤抑制基因。p53基因位于人类17号染色体短臂（17p13.1）。全长约16-20kb。由11个外显子和10个内含子组成。编码产物为分子量53kD的核蛋白。p53基因在进化过程中高度保守，外显子2、4、5、7、8分别编码5个在进化上高度保守的结构。野生型p53（,etal.Useofavidin-biotin-peroxidaseplex(ABC)inimmunoperoxidasetechniques:AparisonbetCytochem,1
6、981;29:577.3RodriguesNR,etal.P53mutationincolorectalcancer.ProcNatlAcadSciUsa,1990,87.4KaklamanisL.p53expressionincolorectaladanomas.AInJPathal,1993,142:87.5HamelinR,LaurentPP,OlahutationsIndiaJ.GynecolOncol,2002,86(2):157-162.7OjedaJM,AmpueroS,RojasP,etal.p53codon72polymorphismandriskofcervi
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