蟾酥对青霉、曲霉、根霉生长抑制作用的研究

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1、蟾酥对青霉、曲霉、根霉生长抑制作用的研究【摘要】　　用不同浓度的蟾酥药液，采用圆形滤纸法就其对青霉、曲霉、根霉的生长是否有抑制作用进行研究。结果表明：蟾酥对青霉、曲霉、根霉的生长没有抑制作用。【关键词】蟾酥　青霉；曲霉；根霉；抑菌圈　　蟾酥对致病菌是否有抑制作用仍在不断的探索当中，现在已证明蟾酥对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌及痢疾杆菌有抑制作用。但对青霉、曲霉、根霉等真菌是否有同样的抑制作用仍未见报道。本实验通过圆形滤纸片法研究蟾酥对青霉、曲霉、根霉三种真菌生长是否具有抑制作用，目的是为进一步的深入研究提供依据。1材料与方法1.1材料1.1.1蟾酥的制备蟾蜍购置于牡丹江地

2、区。洗净其体表后,运用竹刺挤浆法挤净蟾蜍耳后腺的白色液体,涂于洁净的玻璃板上,待阴干后将其刮下研成细粉状置于洁净的玻璃瓶内,放在干燥、阴凉处保存，备用。1.1.2蟾酥的主要成分蟾酥的成分很复杂，包含两大类物质，一类是生物原氨基，这类物质一部分由邻苯二酚衍生物组成，一部分由吲哚系碱类组成，如S-羟色胺、蟾酥特尼定、蟾酥流堇等组成。另一类物质是蟾毒配基B和蟾酥毒素。1.1.3菌种本实验选用的菌种为根霉、曲霉、青霉，属于真菌，由牡丹江师范学院生物系微生物实验室提供。1.1.4马铃薯培养基(PDA)的制备(自然pH值)马铃薯培养基的配方:马铃薯(去皮)200g，蔗糖20g，水1000m

3、l。1.1.5主要仪器高压灭菌锅，食用菌接种器(SS-2801)，恒温培养箱(JT75-2)，电子天平(BP2110)。1.2实验方法1.2.1蟾酥药液的制备用电子天平分别称取120mg和200mg的蟾酥药粉加10ml的蒸馏水,分别配成12mg/ml和20mg/ml的不同浓度的蟾酥药液,封好,备用。1.2.2灭菌将备用的锥形瓶、移液管、拖菌耙、培养皿、蒸馏水、直径1cm圆形滤纸片封好，放在高压锅内灭菌，温度121℃，时间30min。1.2.3菌悬液的制备取活化的青霉、曲霉、根霉在食用菌接种器上的酒精灯火焰旁，用灼烧冷却后的接种环在试管内挑取少量菌苔，并迅速放入试管中，分三个试管

4、分别放入，不断的摇动，封好。达克宁稀释液也依此法制备。1.2.4涂菌和放滤纸片在无菌的条件下，将已融化并冷却至45℃左右的马铃薯培养基倒入无菌的培养皿中，待凝固后，再用无菌的移液管分别吸取不同的霉菌稀释液0.2ml滴入装有培养基的培养皿中,然后用玻璃耙子将菌平推于培养皿的培养基上,再将剪好的园形滤纸片侵入12mg/ml和20mg/ml的蟾酥药液和达克宁药液的稀释液中,待滤纸片浸润后,立即拿出,每个培养皿中放三个滤纸片,滤纸片在培养基上呈三角形放置,然后将培养皿用灭菌的纸包好,倒置于恒温的培养箱中,温度30℃,时间24h。同理，以达克宁药物作为对照的也照此方法处理。24h后观察其

5、效果。2结果通过观察四次实验的结果可以看出,当蟾酥的药液浓度为12mg/ml时,蟾酥对青霉、曲霉、根霉三种真菌的抑制作用并不明显，几乎对其生长没有抑制作用，因此又将蟾酥药液的浓度提高到20mg/ml，进一步进行验证实验，结果表明：当浓度为20mg/ml时，对三种真菌的生长仍没有明显的抑制作用。通过四次反复的验证都没有发现蟾酥对三种真菌有抑制作用。3讨论真菌的细胞壁的主要成分为壳多糖，它是N-乙酰糖分子以β-1.4糖甘键连接而成的多聚糖，由此推测，蟾酥与真菌细胞壁可能不发生作用，不能破坏真菌细胞的细胞壁，由于细胞壁的保护，其他的成分也就无法进入细胞发生反应，真菌由此保护了自己的正

6、常生长。蟾酥不能透过细胞壁进入细胞膜，在蟾酥的成分中含有另一类物质，蟾毒配基B和蟾酥毒素，这类物质是胆固醇的类似物，属于肽类毒素，而肽类毒素的基本上是双组分结构，即一个效应链（A链），另一个结合链（B链），只有A链具有毒性，B链的作用是与膜上的受体结合使A链进入细胞内部，单一的A链和B链都没有活性。蟾酥的这一成分要想发挥作用就必须先实现B链与膜上受体的结合，蟾酥对细菌的破坏作用就是因为蟾酥破坏细菌的细胞壁后，肽类毒素的B链可以和细胞膜的主要成分磷脂结合，使细菌的细胞膜受到破坏而破裂，加速了细菌的死亡。但对于真菌来说，蟾酥不能破坏真菌的细胞壁，有了细胞壁的阻隔，蟾酥的肽类毒素的成

7、分也就失去了破坏作用。蟾酥对真菌的抑菌效果低，作用不明显可能是上述两个方面的结果导致的，也可能存在着其他的原因，有待于进一步研究证实。