尿中ala测定实验报告

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1、308检疫HapyWu尿中δ—氨基—γ—酮戊酸(δ—ALA)的测定一、实验目的学会用乙酸乙酯萃取—对二氨基苯甲醛比色法测定尿中δ—氨基—γ—酮戊酸(δ—ALA)的含量，从而了解铅吸收和铅中毒的诊断。二、实验原理在PH为4.6及温度为100℃的条件下，δ—ALA与乙酰乙酸乙酶缩合生成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，并与显示剂（对二甲氨基苯甲醛）作用生成红色化合物，根据颜色深浅进行比色定量。三、实验步骤1.标准曲线的绘制取具赛比色管10ml6支，按下表配置标准色列：试剂012345ALA标准应用液（ml）0.00.10.30.50.71.0水（ml）2.01.91.71.51.31.0A

2、LA含量（ug)0135710A.各管中加入2ml乙酸缓冲液，0.4ml乙酰乙酸乙酯，混匀，于沸水中加热10分钟，取出冷至室温。B.各管加入4ml乙酸乙酯，加塞振摇1分钟，离心5分钟、取出静置分层。C.各取乙酸乙酯提取液2ml于另外6支管中，各管加入2ml显色剂，加塞振摇，静置10分钟。3A.用分光光度计（波长554），以零管作参比，测其吸光度。根据ALA浓度与吸光度的关系绘制标准曲线。2.尿样测定A.预先测定尿液比重，测得尿样比重为1.010。B.分别取1ml尿样于两支上述一样的管内，各加入水1ml，乙酸缓冲液2ml,混匀。其一为样品管，另一为空白管。向样品管中家兔0.4ml乙酰乙酸乙

3、酯，空白管中加入0.4乙酸缓冲液，充分混匀，同时置沸水浴中加热10分钟，取出冷至室温。C.按标曲绘制的B~D进行，以乙酸乙酯作参比，进行比色定量。四．实验结果与计算1.标准曲线绘制管号012345ALA含量（ug)0135710吸光度A00.0540.1520.2420.2880.4792.尿样结果空白管为0.022，样品管为0.110。带入标准曲线查得样品管中ALA含量为1.83ug。根据尿样比重为1.010，在正常范围内，故3尿中ALA（mg/L)=样品管中ALA含量（ug)=1.83mg/L五．实验结论根据铅实验室检测指标值，尿中δ—氨基—γ—酮戊酸(δ—ALA)的诊断值为8mg/

4、L，因此本实验所用的尿样样品未超标。六．实验讨论1.进行比色定量时，为什么样品测定时用乙酸乙酯作参比？原因是标准曲线用的是应用液，可以用零管参比，而测定管中的最大容积为乙酸乙酯，为了最大限度的消除背景吸收等带来的误差，因此选择乙酸乙酯作为参比。2.若鸟样比重不在正常的范围内，测的结果应如何计算此时应先进行校正，采用公式：尿中ALA（mmol/L）=样品管含量（ug）*1.030-1.000*0.00761（尿样）尿比重-1.0003.实验过程中应注意哪些在处理数据时，应返回检测一下数据结果是否在此方法的线性范围内，否则会影响实验的准确度；同时因为所用的试剂为有机溶剂，易分解，最好采用近期

5、产品，显色剂宜新鲜配制；取样时应准确量取；离心过程中应注意配平；加入显色剂后应在半个小时内完成比色。