活血渗湿方对实验性肝纤维化的作用研究

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1、活血渗湿方对实验性肝纤维化的作用研究作者：张永生卢良威蔡卫民翁红雷刘清君陈群伟【摘要】［目的］确定活血渗湿方抗实验性肝纤维化的疗效。［方法］用经典四氯化碳肝纤维化模型进行活血渗湿方药效试验,并与复方鳖甲软肝片、干扰素等进行对照观察。［结果］血清HA检测、病理组织学观察显示活血渗湿方治疗组、IFNγ治疗组及复方鳖甲软肝片治疗组之间均无显著性差异(P>0.05),但与生理盐水阴性对照组比较差异显著(P<0.05)。［结论］活血渗湿方具有显著的抗实验性肝纤维化的作用。【关键词】肝纤维化;活血渗湿方;复方鳖甲软肝片;干扰素;实验研究　　Abstract

2、:［Objective］TodefinethetherapeuticeffectofBDD’santiliverfibrosis.［Methods］TakeclassicalcarbontetrachlorideliverfibrosismodeltomakepharmacodynamictestofBDDandpareitHAtest，pathologyandhistology，itindicatesthatthereisnomarkeddifferenceamongBDDtreatmentgroup，IFNγtreatmentgroupandFBRT

3、treatmentgroup(P>0.05)，butthereisobviousdifferenceparedalsalinenegativecontrolgroup(P<0.05).［Conclusion］BDDhasthefunctionofantiexperimentalliverfibrosis.　　Keyentalstudy　　肝纤维化是各种慢性肝病（包括病毒性、酒精性、血吸虫性等）的共同病理学基础，是发展至肝硬化的必经阶段。有研究表明慢性肝病发展到肝纤维化或早期肝硬化时是可逆的，但如果发展到晚期肝硬化就不可逆转了。所以肝纤维化尚未发

4、展到肝硬化前，及早阻断和逆转肝纤维化，是防治慢性肝病致肝硬化的关键［1］。活血渗湿方是导师卢良威教授在长期的临床研究中总结出来的经验方，在临床应用及前期的实验研究中已经初步显示出了显著的抗肝纤维化作用［2］。本研究旨在研究活血渗湿方抗肝纤维化的疗效。　　1材料与方法　　1.1实验材料SD大鼠200只，雌雄各半，清洁级，体重180～220g，购自中科院上海实验动物中心，由浙江中医药大学实验动物中心提供饲养条件，自由饮水，预养10天后进入实验阶段。　　1.2药物活血渗湿方浸膏制剂：方药由穿山甲、山慈菇、黄芪、茯苓及水红花子等组成，由浙江中医药大学中医门诊部提供，

5、用自动煎药机制备，浓缩成为生药含量为6g·ml-1的浸膏备用。干扰素γ：由上海克隆生物高技术有限公司制造，100万IU/支，批号：970521。复方鳖甲软肝片：由内蒙古集宁制药厂制造，0.5g/片，批号：20000903。　　1.3模型制作及分组设正常组大鼠20只。其余SD大鼠用于肝纤维化模型的制作。将四氯化碳与橄榄油按4∶6比例配成40%油剂。按0.3ml/100g体重课题皮下注射，2次/周。每周末随机处死2只大鼠观察肝脏组织学变化，直到中度肝纤维化形成。分组：造模8周后，中度肝纤维化形成，随机选取10只模型大鼠作为干预前对照。将模型大鼠随机分为以下几组

6、，给药剂量按照“等效剂量”的换算方法计算活血渗湿方、复方鳖甲软肝片及干扰素的等效干预剂量如下。　　(1)活血渗方干预组：以活血渗湿方复方煎液按10g·kg-1生药量灌胃，1次/天；(2)复方鳖甲软肝片阳性对照组：软肝片用蒸馏水溶解，按0.625g·kg-1体重灌胃，1次/天；(3)IFNγ阳性对照干预组：IFNγ20万U·kg-1体重，肌注，1次/天；(4)生理盐水阴性对照组：以生理盐水2ml/100g灌胃，1次/天；(5)另设正常对照组20只，灌服同样剂量的生理盐水。　　每周称量大鼠体重以调整药物的剂量，连续用药12周后，取血，处死大鼠，取大鼠肝脏置中

7、性福尔马林液中固定，行常规HE染色、特殊染色及免疫组织化学标记染色。　　1.4观察指标　　1.4.1血清学全部大鼠摘取眼球取血，分离血清进行肝功能检测，包括血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALb）、白／球蛋白比例（A/G）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）等生化指标；并检测大鼠血清透明质酸（HA）。　　1.4.2组织学观察取大鼠肝脏左、右叶各1块，立即用10%中性磷酸缓冲液（PBS，pH=7.0，以下同）福尔马林液中固定，固定过夜后取材，按1×1×0.2cm大小，标记后流水冲洗过夜，梯度酒精脱水，二甲苯透明后浸蜡，常规石蜡包埋切片，进行常规染色及特殊染

8、色和免疫组织化学检测。　　评定标准：HE染色，观察肝