淀粉酶粗酶液最适反应温度的测定.doc

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1、本科学生实验报告姓名：学号：学院：专业、班级：实验课程名称＿指导教师及职称开课学期至学年学期云南师范大学教务处编印实验序号及名称：实验三、淀粉酶粗酶液最适反应温度的测定实验时间：2014.5.7实验地：睿智3栋121实验室一、实验目的：了解不同温度条件对酶活性的影响，掌握酶最适反应温度的测定方法。二、实验原理：酶促反应与一般化学反应一样，受温度的影响，反应速度随温度的升高而加快，但因为酶是蛋白质，在温度升高的同时蛋白质的变性速度也在加快，从而又会使反应速度变慢，直至使酶完全失活。因此温度对酶促反应速度的影响具有双重性，其表现是两种对抗效应的综合效果。所以只有在某一温度范围内时，酶促反应速度

2、才会随着温度的升高而升高，达到最大时的反应温度称为酶作用的最适温度。三、实验材料（一）材料1.淀粉酶发酵粗酶液2.0.1mol/L，pH5.5的乙酸-乙酸钠缓冲液配制方法：（1）在1000mL烧杯中加入800mL去离子水。（2）加入11.57g三水乙酸钠和0.85mL冰乙酸于烧杯中，搅拌溶解。（3）测定溶液的pH，若pH偏离5.5，用乙酸溶液或乙酸钠溶液调节至5.5。（4）用去离子水定容至1000mL。（5）室温储存，用前要检查pH。若要长期储存，需加入0.2%的叠氮化钠来防止微生物生长变质。3.D-葡萄糖（C6H12O6）标准液，浓度为1mg/mL4.2%（w/v）可溶性淀粉溶液（现配现

3、用）称取2.0克可溶性淀粉，用约80mL缓冲液调匀，加热煮沸直到淀粉完全溶解；5.DNS试剂（二）仪器1.试管及试管架2.10mL离心管3.离心机4.移液器5.电子天平6.恒温水浴锅7.pH计8.涡旋混合器9.紫外可见分光光度计、比色皿、记时器10.电磁炉、搪瓷缸一、实验方法、步骤及注意事项：1.本实验在室温至70℃之间选择不同温度测定淀粉酶粗酶液酶活力，以找出酶在此条件下的最适温度。反应pH为5.5。2.用缓冲液稀释酶液至合适倍数。3.取18支试管，分别按下表编号并放入相应温度的水浴中试管号对照1支反应2支对照1支反应2支对照1支反应2支对照1支反应2支对照1支反应2支对照1支反应2支反

4、应温度室温30℃40℃50℃60℃70℃4.按淀粉酶酶活测定方法测定在不同温度条件下淀粉酶发酵粗酶液的酶活力。5.计算结果6.结果处理：列出不同温度下酶活力的实验测定数据，并绘出温度曲线，找出最适温度。注意事项：1、每个同学都参与实验2、称量天平分开使用3、称量器皿用后摖净后再使用，避免叉污染试剂。4、使用前检查仪器设备是否完好，使用后及时清理干净。一、实验结果分析：结果温度ODAB平均值室温2.6812.6982.690302.7642.7862.775402.9242.9352.930502.8572.9032.880602.6412.7212.681702.6302.3632.497

5、六、实验总结7、教师评语及评分：签名：年月日