强心ⅰ号方强心作用有效部位提取与分离

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1、强心Ⅰ号方强心作用有效部位提取与分离胡军娜，贾继明，王宏涛，赵宝华，郑亚杰，唐思文，徐登峰，赵韶华【摘要】　　目的提取分离强心Ⅰ号方强心作用的有效部位。方法以大孔吸附树脂为分离材料，将强心Ⅰ号方组成药材的水提物、醇提物分别经蒸馏水，10%乙醇，30%乙醇，50%乙醇，70%乙醇，95%乙醇洗脱制得样品，然后通过离体蛙心试验观察受试样品的强心作用。结果水提物经30%乙醇，50%乙醇洗脱的样品和醇提物经30%乙醇，50%乙醇洗脱的样品对离体蛙心作用明显，其强心作用的半数有效浓度分别为：0.017g生药/ml，0.58g生药/ml，10.11g生药/ml，21.

2、44g生药/ml。结论强心Ⅰ号方中各味药材的水提物经30%乙醇，50%乙醇洗脱的样品和醇提物经30%乙醇，50%乙醇洗脱的样品具有明显强心作用。【关键词】强心Ⅰ号方；有效部位；大孔树脂；强心作用；离体蛙心　　Abstract：ObjectiveToextractandisolatetheeffectiveingredientsinCardiacⅠpound.MethodsMacroporousabsorptionresinplesentofthefrogisolatedheart.ResultsThelocusofl，0.58gcrudedrugs/ml，

3、10.11gcrudedrugs/ml，21.44gcrudedrugs/ml,respectively.ConclusionThelocusofl。以1BV（1倍柱体积，即12kg的AB-8树脂折算体积为18l）的流速（即18L/h，300ml/min）通过树脂柱，上样完成后依次用4BV量（18×4=72L）的蒸馏水及10%，30%，50%，70%和95%的乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液。　　2.2.3水提物的分离水提物加蒸馏水稀释至密度为0.1g药材/ml。以1BV（1倍柱体积，即13kg的AB-8树脂折算体积为20L）的流速（即20L/h，340ml/

4、min）通过树脂柱，上样完成后依次用4BV量（20×4=80L）的蒸馏水及10%，30%，50%，70%和95%的乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液。　　2.2.4洗脱液的浓缩将不同浓度洗脱液分别用浓缩机组（30%，50%，70%，95%乙醇）、夹层锅（蒸馏水、10%乙醇）进行初步浓缩，然后在旋转蒸发仪中进一步浓缩至适当浓度。　　2.2.5干燥及称量将不同乙醇浓度洗脱液，先在鼓风干燥箱中吹至呈浓浸膏状，在真空干燥机里进行减压干燥，干燥后称量各个洗脱部位的重量，计算出每克有效部位相当于的生药量(g/g)。　　2.3离体蛙心实验　　2.3.1离体蛙心预实验受试物参考

5、24.8g生药剂量按1∶0.5的剂距设置剂量，将受试物溶解成合适浓度后，进行实验。　　实验方法：取制备好的离体蛙心〔2～5〕，打开BL-420E+生物机能实验信号采集系统，观察蛙心收缩曲线，待稳定后记录正常蛙心收缩曲线；将蛙心套管内任氏液换成低钙任氏液，在心脏收缩显著减弱时记录心衰模型蛙心收缩曲线；向蛙心套管内滴加受试物，对照组加等量任氏液，记录蛙心收缩曲线，以观察各样品是否有强心作用。　　2.3.2离体蛙心半数有效浓度实验具有强心作用的样品分别配制成0.1，0.05，0.025，0.0125，0.00625，0.003125g干粉/ml的浓度，按预实验方

6、法进行实验，采集给药前后心脏最大收缩力，按以下公式计算强心率（QXL）：QXL＝（给药后最大收缩力－给药前最大收缩力）×100%/给药前最大收缩力。　　2.3.3统计方法采用BLISS软件计算半数有效浓度。　　3结果　　3.1大孔树脂分离各部位　　3.1.1醇提物经不同浓度洗脱液洗脱后所得到的有效部位见表1。　　表1醇提物洗脱液洗脱所得有效部位（略）　　3.1.2水提物经不同浓度洗脱液洗脱后所得到有效部位见表2。　　表2水提物洗脱液洗脱所得有效部位（略）　　3.2离体蛙心实验结果水提取部位有效性筛选结果：〕.合肥：安徽科学技术出版社，1995：204.　　

7、〔3〕张风芝.生理学,第2版〔M〕.北京:人民卫生出版社,1994:174.　　〔4〕望文桢,张颖.如何提高蛙心插管的成功率〔J〕.2003,21（4）:128.　　〔5〕邓天勤,谢振生,张玉婵.蛙心灌流实验中蛙心插管方法的改进〔J〕.卫生职业教育,2006,24（18）:99.　　〔6〕于纯淼，于栋华，于国萍.丹参酮的提取工艺研究〔J〕.中国中医药科技，2006，13（3）：194.　　〔7〕PingH,QiongLL,GuoAL,etal.Multi-ponentHPLCfing-erprintingofRadixSalviaeMiltiorrhiza

8、eandItsLC-MS-MSIdentification〔J〕.