stat基因在cdt细胞介导抗肿瘤免疫中的重要作

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1、STAT3基因在CD4＋T细胞介导抗肿瘤免疫中的重要作用作者姓名（排序）：YanweiShen,WeiyiPeng,YoshihiroMiyahara,ShuZheng,Rong-FuWang,andHelenY.Wang作者单位：浙江大学肿瘤研究所第一作者姓名及身份证号码：沈彦伟330102198110071215通讯作者姓名：郑树，王荣福1背景STAT家族是介导细胞因子、生长因子信号通路上启动蛋白转录的重要转录因子，它们在许多信号通路的细胞分子事件中都起到重要作用，例如细胞分化、细胞增殖和存活。其中STAT

2、3基因除了在正常生理状态下发挥重要作用，其在肿瘤发生过程中参与了诱导细胞化生，而与肿瘤发病密切相关。已有多组报导显示，抑制STAT3的表达能够杀伤荷瘤小鼠体内的肿瘤，证明其抑制剂的使用能够增强机体抗肿瘤作用。在本研究中，我们使用LoxP-Cre系统建立了在CD4+T细胞中特异性敲除STAT3基因的小鼠。此小鼠基本生理状况与野生型没有明显差别，但在体外培养的CD4+T细胞相对于野生型，却在TCR激活后表现出增殖减弱、凋亡增加。异体瘤接种实验表明，接种B16黑色素瘤于CD4-STAT3缺陷型小鼠后，其生长速率高于野

3、生型。T细胞过继治疗模型显示，此种STAT3缺陷的CD4+T细胞无法扩增CD8+T细胞，而导致无法清除B16黑色素瘤。进一步研究显示，STAT3缺陷的CD4+T细胞在TCR激活后，相对于野生型的CD4+T细胞，表达Bcl-2更低，Bak更高。这一结果提示STAT3基因对于TCR激活后的T细胞存活十分重要，其能保护T细胞免于凋亡，而得到健全的T细胞介导抗肿瘤免疫能力。方法鉴定STAT3-/-CD4+T细胞表型CD4+T细胞分化能力及细胞因子释放分析CD4+T细胞增殖能力分析和凋亡分析B16异体瘤移植实验及T细胞过

4、继免疫实验STAT3及相关信号通路分析1.CD4+T细胞STAT3敲除小鼠的构建结果Fig1.Loxp-Cre体系的建立及westernblot分析CD4+T细胞中STAT3敲除2.STAT3-/-CD4+T细胞表型Fig2.STAT3-/-小鼠的CD4+和CD8+T细胞与野生型STAT3f/f小鼠没有明显差别。3.STAT3-/-敲除小鼠及STAT3f/f野生型小鼠的CD4+T细胞亚群及诱导分化能力分析Fig3A.nTreg及诱导Th17流式细胞术分析，以及Treg抑制功能分析。Fig3B.ELISA结果显示

5、STAT3-/-和STAT3f/f小鼠的CD4+T细胞在TCR激活后细胞因子释放能力差异Fig4.STAT3-/-的CD4+T细胞在TCR激活后增殖减少、凋亡增加Fig5.B16异体瘤移植实验及T细胞过继免疫实验，检测STAT3-/-的CD4+T细胞介导的抗肿瘤免疫能力Fig6A.STAT3基因在TCR信号通路中的作用Fig6B.STAT3基因在凋亡通路和MAPK通路中的作用讨论我们发现STAT3-/-小鼠的CD4+T细胞增殖能力下降、细胞因子释放能力下降。我们进一步证实这种增殖能力和细胞因子释放的下降其实质是

6、其凋亡的增多。通过移植瘤实验和T细胞过继免疫实验证实，STAT3敲除的CD4+T细胞其抗肿瘤免疫能力下降。STAT3-/-小鼠的CD4+T细胞表现出的这些表型与其TCR激活后TCR下游Bcl-2凋亡信号通路、MAPK通路的调控相关。以上这些发现证实，STAT3基因是TCR激活后T细胞存活和抗凋亡的关键基因，其功能的完整性对T细胞介导的抗肿瘤免疫是不可或缺的。