转染融合基因的dc抗肿瘤免疫效应

《转染融合基因的dc抗肿瘤免疫效应》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、转染融合基因的DC抗肿瘤免疫效应作者：张文彬张海红孔维查晓陈廷清邓碧芳任原黄建鸣【摘要】目的研究转染融合基因（GMCSFsurvivinGMΔSur）的树突状细胞(DC)在体外诱导高效而特异的抗肿瘤免疫效应。方法用jetPEiTMMacrophage转染体系，将构建的GMΔSur融合基因转染入DC，用流式细胞仪检测DC的表面分子HLADR、CD83、CD80、CD86表达的高低;用LDH法测定转染融合基因的DC诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)杀伤肿瘤细胞（HT29和OVCAR3）的能力。结果转染融合基因的DC细胞中可检测到GMΔSur融合蛋白的表达；DC表面

2、高表达HLADR、CD83、CD80、CD86；PHA/rhIL2长期培养（21d）的T细胞CD8+比例明显增加；转染融合基因的DC对HT29肿瘤细胞的杀伤率显著高于未修饰的DC的杀伤率。结论GMΔSur基因转染修饰的DC能选择性诱导MHCI类分子限制的CTL的特异性，显著提高DC的抗原提呈功能和诱导高效而特异的抗肿瘤免疫效应。【关键词】肿瘤;树突状细胞;融合基因;CTL；survivin；　　Abstract：ObjectiveTostudythespecificantitumorimmunologicaleffectsinducedbydendriticcellstr

3、ansfectedidcontainingGMΔSurfusiongeneancytotoxicTlymphocyte(CTLs)totumorcellsuchhigherthanthoseofblankDCcells.ConclusionGMΔSurgenemodifiedDCcellscouldinduceMHCⅠspecificcytotoxicTlymphocytesandstrikinglyraisedDCcell,santigenpresentfunctionandcouldinducehigheffectiveandspecificanticancerimmun

4、ologicaleffect.　　Keyor；Dendriticcell;FusionGene;CTL;survivin　　0引言　　survivin基因是一种新的抗凋亡基因，广泛表达于人的胚胎发育组织,在正常成人组织中不表达，但在大多数肿瘤组织中表达,对肿瘤的发生、发展起着重要作用，是一个较为特异的肿瘤相关抗原（Tumorassociatedantigen，TAA）基因[1]。树突状细胞（Dendriticcell，DC）是体内重要的专职抗原提呈细胞，直接启动和调控机体特异性的抗肿瘤免疫应答[2]。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）对DC的增殖分化、细胞活力以及抗原提呈

5、功能有着重要的调节作用[3]。我们构建的GMCSFsurvivin融合基因表达质粒（pcGMΔSur）并转染人外周血来源诱导扩增的树突状细胞，探讨转染后DC的生物学特性及诱导产生的抗肿瘤免疫效应。　　1材料与方法　　1.1主要试剂pcDNA3.1(-)购自invitrogen公司。HT29细胞株、GMCSF基因由四川康龙生物医学有限公司惠赠。survivin基因由本科室从HT29细胞中克隆获得，经DNA测序与GenBank上收载的survivin序列一致。各种限制性内切酶、连接酶购自TaKaRa公司。LDH细胞毒分析盒（Cytotox96）购于Promega公司；jetP

6、EITMMacrophage转染体系购自polyplustransfection公司、人白细胞介素4（IL4）、GMCSF购自晶美生物公司。CD1a、CD80、CD83、CD86、HLADR单抗由华西医院肿瘤生物实验室提供。　　1.2GMCSF与survivin基因的连接以GMCSF基因DNA为模板，pGM1、pGM127为引物进行PCR扩增。以survivin为模板，Psur01、Psur02为引物进行PCR扩增。扩增DNA纯化后，BamHI内切酶37℃酶切2h，37℃15min热终止反应，反应物纯化后加入T4DNAligase，16℃连接18h。GMCSF与缺

7、失八个氨基端氨基酸的survivin之间加入一段含三个重复氨基酸残基序列为GGGGS的肽段。利用氨基酸密码的同义突变，在连接子碱基序列的中间位置形成一个BamHI内切位点。　　1.3pcGMΔSur质粒构建以上述连接物为模板，pGM1、pSur02为引物，反应条件同。反应物经纯化后，分别经EcoRI、HindⅢ酶切。质粒pcDNA3.1(-)DNA经同样处理。酶切后纯化DNA并定量。取酶切后纯化的GMCSFsurvivinDNA5μg，pcDNA3