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1、灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响杨红梅王黎陈洁李宜培裴瑞【摘要】目的观察灵芝多糖肽(GLPP)对Alzheimer样大鼠海马超微结构、海马组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以及空间学习记忆能力的影响。方法雄性orris水迷宫法测试各组大鼠空间学习记忆能力，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量,透射电镜观察海马线粒体和突触结构的改变。结果寻台潜伏期模型组大鼠较对照组明显延长(P0.05)，GLPP组较模型组明显缩短(P0.05)
2、;NS组与模型组比较无显著差异。模型组较对照组海马SOD活性降低、MDA含量升高(P0.05);GLPP组较模型组SOD活性升高、MDA含量降低(P0.05);NS组SOD活性降低、MDA含量升高，与模型组比较无显著差异。透射电镜结果显示：对照组、GLPP组大鼠海马线粒体神经轴突和神经突触基本正常;模型组和NS组大鼠海马线粒体膜结构破坏，线粒体肿胀，线粒体嵴模糊、消失，结构紊乱，神经髓鞘内神经细丝稀少，神经突触缺失、减少，突触密度降低，突触间隙不清，突触小泡减少。结论GLPP可防止持续光照对大鼠海马超微结
3、构的破坏和减轻Alzheimer样大鼠的空间记忆障碍【关键词】灵芝多糖肽;阿尔茨海默病;自由基;Morris水迷宫;透射电镜阿尔茨海默病(AlzheimerDisease，AD)是一多发于老年的中枢神经系统退行性疾病，以进行性记忆减退、认知功能障碍、易激惹及睡眠障碍等为主要临床症状，病理特征主要有老年斑、神经纤维缠结、神经元死亡等，其病因及发病机制尚不清楚〔1〕，其中氧化应激在AD发病过程中起重要作用〔2〕。有研究发现，自由基参与了老年斑、神经纤维缠结、神经元死亡等特征性的病理损害〔3〕，并可引发膜脂质过
4、氧化反应并生成丙二醛(MDA),MDA的产生量与脂质过氧化反应相平行〔4〕;而超氧化物歧化酶(SOD)是机体重要的抗氧化酶,具有清除氧自由基,保护细胞免受损伤的作用。灵芝是我国传统的延年益寿中药,具有“益精气、扶正固本”的作用。灵芝多糖、灵芝多肽是其主要有效成分,以往研究表明,灵芝多糖具有清除体内自由基、抗氧化等作用〔5，6〕。本研究通过观察灵芝多糖肽(GLPP)对Alzheimer样大鼠海马超微结构、海马组织SOD活性和MDA含量以及空间学习记忆能力等的影响，探讨GLPP对AD的治疗作用及机制。 1材
5、料与方法 1.1动物雄性DA检测试剂盒购自南京聚力生物医学工程研究所。 1.2.2模型制备大鼠随机分为对照组、模型组、NS组、GLPP组，每组15只。除对照组(正常昼夜节律)外，其余各组每天连续光照(光照度400Lux)24h，共30d。其间GLPP组每天一次GLPP250mg/kg灌胃;NS组用相同体积的生理盐水灌胃;模型组只进行连续光照，不作其他处理。实验期间给予大鼠自由摄食与饮水。 1.2.3检测指标 1.2.3.1大鼠空间记忆能力的测定采用Morris水迷宫系统测试大鼠的空间记忆能力。Mo
6、rris水迷宫实验系统由水迷宫装置、水迷宫图像自动采集和处理分析系统组成。水迷宫池分为四个象限(通常以与平台所在象限相对的象限为第一象限,实验中取第一象限的潜伏期为记录成绩),训练时大鼠从任何一象限入水,面向池壁轻放于水中,记录入水时间及潜伏期(即大鼠从入水到找到平台后四肢爬上平台时所需的时间)。每只大鼠每天在4个象限学习4次,每次游泳时限为60s,即在60s内未找到平台者潜伏期记为60s，休息30～60s后再进行下一次训练。本研究所采取的策略是第31天采用Morris水迷宫训练7d,以第7天的潜伏期成绩
7、反映大鼠的空间记忆能力。 1.2.3.2大鼠海马SOD活性与MDA含量检测水迷宫训练7d后,处死大鼠,冰台上快速分离大鼠海马组织，加入冰生理盐水,冰浴下超声波破碎制成10%(in,10min,取上清液用于SOD活性和MDA含量的检测，严格按照试剂盒说明书进行。 1.2.3.3电镜标本的制作及大鼠海马超微结构的观察Morris水迷宫测试完毕(第37天)后，每组随机提取2只大鼠用6%水合氯醛麻醉后，迅速切开胸腔，将灌注针头从大鼠心脏心尖部刺入从左心室至左心房，同时立即切开心脏右心耳，先用生理盐水(4℃预冷
8、)300ml灌注冲洗，随后用4%多聚甲醛+0.5%戊二醛400ml(4℃预冷)灌注，以动物尸体展开，肢体展开变硬为标准。灌注结束即迅速断头，在冰盘上取出脑组织，剥离左侧海马，取中段组织块放入3%戊二醛中4℃冷藏。海马电镜标本制作及观察：将海马用冲洗液(PBS)反复清洗，冲洗完毕，将海马组织进行后固定，即用1%锇酸固定1～2h。制样时再切取海马组织块约1mm3，经漂洗液充分洗涤后进行脱水：50%、70%、90%乙醇各10～15m
