西红花质量评价研究论文

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1、西红花质量评价研究论文朱友双，牛万刚，姚宝君【摘要】应用高效液相色谱和DAD检测器对上海、浙江、江苏大产地的药材进行了全面质量考察。本文可提供清晰的HPLC指纹图谱，药材总苷含量在23%～27%之间为优，指纹图谱相似度0.9。西红花总苷的指纹图谱特征性及专属性强，可结合含量测定用于全面控制药材质量，确保每批产品的均一性。本文建立了西红花的指纹图谱检测标准，实验方法简便、准确、重复性好。【关键词】西红花；含量测定；指纹图谱西红花为鸢尾科植物番红花（CrocussativusL.）的干燥柱头.freelg精密称定，70℃加甲醇索氏提取至溶液无色，冷却，甲醇定容至100ml容量瓶

2、。2.1.1.2标准液取西红花苷-Ⅰ对照品用甲醇制成0.02mg/ml标准液。2.1.1.3供试液分别精密吸取上述样品液各1ml，甲醇稀释，定容至20ml。2.2测定波长的选择西红花紫外-可见测吸收曲线，分在λmax（432±2）nm及（458±2）nm处有最大吸收。2.3西红花药材总苷含量测定取十个批号药材供试液。以西红花苷-Ⅰ为基准物，433nm处测定吸收度。见表3。表3西红花药材总苷含量2.4HPLC指纹图谱2.4.1色谱条件色谱柱：HypersilODS2250×4.6mm,5μm;流动相：甲醇-水（53：47）；甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（48：52）；流

3、速1ml/min;柱温30℃；检测波长440nm。2.4.2样品液及标准液制备2.4.2.1样品液分别称取十个批号的药材研成细粉，精密称取60mg，甲醇索氏提取至无色，甲醇定容至100ml。2.4.2.2标准液取西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和西红花苷-Ⅲ、西红花苷-Ⅳ混合物对照品用甲醇制成0.03mg/ml标准液。2.4.3指纹图谱技术对西红花药材质量评价2.4.3.1流动相的考察与优化分别用甲醇-水（50：50）、甲醇-水（53：47）、甲醇-水（55：45）、甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（50：50）、甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（48：52）、甲醇-0.01

4、mol/L磷酸二氢铵（45：55）六种体系进行洗脱，结果以甲醇-水（53：47）和甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（48：52）体系得到的色谱峰形较好，尤其以甲醇-0.01mol/L磷酸二氢铵（48：52）峰形最好，分离度高，大部分得到基线分离，且较稳定。2.4.3.2参照峰的选择西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ为指纹图谱中峰面积积分值较大、出峰时间较早、很稳定的两个峰，而且均可制备纯度98%的对照品，西红花苷-Ⅲ和西红花苷-Ⅳ为指纹图谱中峰面积积分值较小、出峰时间较晚、两个峰较稳定。2.4.3.3指纹图谱的测定精密吸取药材提取液2ml，甲醇定容量至10ml，精密吸取20μl，

5、进样，记录60min的色谱图（见图1），以西红花苷-Ⅰ的保留时间和峰面积积分值为1，计算相对保留时间和峰面积积分值的比值。2.4.4实验方法考察2.4.4.1标准曲线制备分别精密吸取西红花苷-Ⅰ标准液0.05、0.10、0.15、0.20、0.25ml于1ml容量瓶中，西红花苷-Ⅱ标准液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于2ml容量瓶中，西红花苷-Ⅲ标准液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于2ml容量瓶中，西红花苷-Ⅳ标准液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于2ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。各浓度进样20μl，按色谱条件测得峰面积积分值。以峰

6、面积为纵坐标，进样量（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。见表4。表4西红花苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ标准曲线制备标准曲线的回归方程：西红花苷-Ⅰ：Y=45.443X+66.54,r=0.9996（n=5）,西红花苷-Ⅱ：Y=188.53X+425.37,.freelg/ml标准液。表6标准品精密度实验2.4.4.4稳定性实验取同一批西红花药材，按2.1.1方法制备样品液，分别在0、2、4、6、8h检测指纹图谱，结果各峰峰面积积分值比值的RSD在0.38%～1.93%之间，相对保留时间差别在0.01～0.81min。2.4.4.5重现性实验取同一批西红花药材，按2.1.1方法制备样品

7、液，平行操作制备5份，分别检测指纹图谱，结果各峰峰面积积分值比值的RSD在3.17%～3.59%之间，相对保留时间差别在0.01～0.81min。2.4.4.6加样回收率实验精密吸取批号20051102-03-1药材1ml，加入标准液西红花苷-Ⅰ0.5ml,至10ml容量瓶，甲醇稀释至刻度。进样20μl。见表7。表7加样回收率实验2.4.5实验结果2.4.5.1指纹图谱测得十批西红花药材的指纹图谱见图1，标定共有峰9个，其中包括作为参照峰的西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ色谱峰（3、4）。见图2。2.4.5.2共有指纹峰